小鼠小动脉内皮细胞钙动力学和膜电位变化分析

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从小鼠大脑中收获的小动脉内皮管固定在具有连续缓冲流的腔室中。

将腔室置于录音设置中。

引入钙敏感荧光染料。孵育以允许细胞吸收染料。

清洗以去除任何非内化染料。

电极插入内皮细胞并记录静息膜电位。

浴液温度提高到生理温度,以促进细胞内钙与染料的结合。

激发染料并测量荧光以量化基线细胞钙水平。

引入一种与内皮细胞上的特定 G 蛋白偶联受体结合的药物,启动信号级联反应。

这种级联将钙离子从内质网释放到细胞质中,增强钙染料结合和荧光。

细胞质钙水平升高也会激活钾通道,促进钾离子外流并降低膜电位。

记录数据。

荧光增加和膜电位降低表明内皮管功能正常。

要测量内皮膜电位,在通过四倍物镜观察时,小心地将锋利的电极尖端放在动脉内皮管的细胞上方,使用显微纵器进入流动的生理盐溶液中。逐渐将放大倍数增加到 400 倍,并根据需要重新定位电极尖端。使用显微纵器,将锋利电极的尖端轻轻插入内皮管的一个细胞中,然后开始使用静电计记录VM。

一旦内皮静息 VM 在负 30 至负 40 毫伏之间稳定,根据实验目标应用所需的药物。在37摄氏度下将质膜或所需细胞器的荧光跟踪器加载内皮管15至30分钟。用新鲜的超融合生理盐溶液洗涤细胞,并在显微镜下以相应染料的激发波长对活细胞进行成像。

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Last updated: 27 June 2026