慢性癫痫诱导大鼠兴奋性神经递质水平的评估

取一只对照大鼠和一只慢性癫痫诱导的大鼠，在海马体中植入引导插管和脑电图或脑电图电极。

癫痫诱导增加兴奋性神经递质释放，导致离子流入突触后细胞，从而产生持续的兴奋电位。这会导致使用电极记录的同步电活动爆发，称为癫痫发作。

将带有半透膜的微透析探头插入插管。

将大鼠拴在脑电图记录系统的笼子上。

通过探头入口将生理缓冲液注入脑组织。

确保没有癫痫发作并通过探头出口收集细胞外液以评估神经递质水平。

癫痫大鼠基础水平升高表明癫痫介导的升高。

注入高钾缓冲液并重新收集样本。

钾的增加会延长神经元的兴奋性，触发神经递质的持续释放。

癫痫大鼠和对照大鼠神经递质水平的暂时峰值表明钾诱导的高增加。

首先根据制造商用户指南准备首次使用的微透析探头，并用林格氏溶液填充它们。然后，切割 10 厘米长的 FEP 管，并使用不同颜色的管路适配器将它们连接到探头的入口和出口插管。确保管道接触适配器，所有连接中都没有死角。

用镊子牢牢握住动物的头部，将假插管从导轨上取下。将微透析探头插入导向插管，并使用造型粘土进一步加固插管。接下来，将动物连接到系留脑电图记录系统。然后将动物放入 Plexiglas 圆筒中，让它探索新环境。跟随清醒和自由移动的老鼠运动。

然后，使用管道适配器将探头的入口连接到 2.5 毫升注射器，并使用装有林格氏溶液的钝 22 号针头。连续推动 10 毫升注射器的活塞，在 2.5 秒内将 1 毫升林格氏溶液推入探头。检查出口上是否出现液体滴，以指示探头何时可以使用。最后，用林格氏溶液填充通过管道适配器连接到 FEP 管道的 2.5 毫升注射器，并将它们安装到输液泵上。以每分钟两微升的速度启动泵，让它运行过夜。

通过视频脑电图记录验证样本采集前三个小时内没有癫痫发作后，停止携带装满林格氏溶液的FEP管插管注射器的泵。安装另一组 2.5 毫升注射器连接到 FEP 管，管路适配器装满含有 100 毫摩尔钾溶液的改良林格氏溶液。以每分钟 2 微升的速度启动泵，然后让它运行。检查系统中是否没有气泡，并确保管道接触适配器，所有连接中都没有死角。

然后，检查出口上是否出现液体滴，以表示探头何时可以使用。接下来，将装满林格氏溶液的注射器的FEP管连接到每只动物探头的入口插管，并等待出口尖端出现液滴。将探头的出口连接到 FEP 管，从而收集在试管中。

FEP 管插入带有穿孔盖的封闭 0.2 毫升试管中。并通过用一块造型粘土固定管子来确保管子保持在原位。在以每分钟 2 微升的速度运行泵 60 分钟而不收集样品进行平衡后，系统在基线条件下连续收集 5 个 30 分钟透析液样品。并将样品储存在冰上。

10 分钟后，将装有 100 毫摩尔钾林格氏溶液的注射器中的管子切换到普通林格氏溶液，让泵运行。收集第五次平衡后透析液后，每 10 分钟收集 20 微升透析液馏分，持续一小时。然后收集另外三个 30 分钟的透析液样本并停止泵。最后，实验后将样品储存在零下80摄氏度，直到HPLC分析。