慢性癫痫诱导大鼠中兴奋性神经递质水平的评估

取一只对照组大鼠和一只海马区植入了引导套管和脑电图（EEG）电极的慢性癫痫诱导大鼠。

癫痫诱导会增加兴奋性神经递质的释放，导致离子流入突触后细胞，从而产生持续的兴奋性电位。这会引起同步化的电活动爆发，即通过电极记录到的癫痫发作。

将带有半透膜的微透析探针插入套管中。

将大鼠固定在脑电图记录系统的笼子上。

通过探针入口将生理缓冲液灌注至脑组织中。

确保无癫痫发作，并通过探针出口收集细胞外液以评估神经递质水平。

癫痫大鼠中升高的基础水平表明癫痫介导的增加。

灌注高钾缓冲液并重新收集样品。

钾离子浓度升高会延长神经元的兴奋性，从而触发神经递质的持续释放。

癫痫组和对照组大鼠神经递质水平的暂时性升高表明，高钾诱导了神经递质的增加。

根据制造商的用户指南，首先对微透析探针进行初次使用前的准备，并用林格氏液将其填充。然后，截取10厘米长的FEP管，使用不同颜色的管路接头将其连接至探针的进样口和出样口。确保所有连接处管路与接头紧密接触，无任何死腔存在。

用镊子夹住动物头部并牢固固定，将假性套管从其导向套管中取出。将微透析探针插入导向套管中，并使用模型黏土进一步固定套管。接着，将动物连接至固定式脑电图记录系统。然后将动物放入有机玻璃圆筒中，使其探索新环境。观察清醒且自由活动大鼠的运动行为。

然后，使用管路连接件将探针的入口端连接至含有林格溶液的2.5毫升注射器，该注射器配备钝头的22号针头。通过持续推动2.5毫升注射器的活塞，在10秒内将1毫升林格溶液推入探针中。观察出口端是否有液滴出现，以确认探针已准备就绪可供使用。最后，使用管路连接件将林格溶液装入连接氟化乙烯丙烯共聚物（FEP）管路的2.5毫升注射器中，并将其安装到输注泵上。以每分钟2微升的速度启动泵，并使其过夜运行。

通过视频脑电图记录确认采样前3小时内无癫痫发作后，停止携带已接充满林格液的FEP管路套管注射器的泵。安装另一套连接FEP管路并通过管路接头填充了含100毫摩尔钾溶液的改良林格液的2.5毫升注射器。以2微升/分钟的流速启动泵并使其运行。检查系统中是否存在气泡，并确保管路与接头接触紧密，所有连接处无死腔。

然后，观察探针出口处是否有液滴出现，以确认探针已准备就绪可供使用。接下来，将装有林格液的注射器所连接的氟化乙烯丙烯共聚物（FEP）管路与每只动物探针的入口套管相连，并等待探针出口尖端出现液滴。将探针的出口端连接至通向试管收集液滴的FEP管路。

将FEP管插入带有穿孔盖的封闭式0.2毫升离心管中，并用一小块橡皮泥固定，确保管子位置稳定。启动泵，以2 µL/min流速运行60分钟，期间不收集样品，以平衡系统。随后，在基线条件下连续收集五个30分钟的透析液样品，并将样品置于冰上保存。

10分钟后，将连接含100毫摩尔氯化钾林格液注射器的管路更换为连接正常林格液的管路，并启动泵。在收集第五份平衡后透析液后，每10分钟收集一次20微升透析液，持续一小时。然后额外收集三份30分钟的透析液样品，随后停止泵运行。最后，实验结束后将样品保存于-80摄氏度，直至进行高效液相色谱分析。