小鼠脑组织冰冻断裂标本中神经元膜蛋白的免疫标记

取一份置于缓冲液中的小鼠脑组织冰冻断裂样本。

标本用铂进行镀膜以增强表面细节，并用碳镀膜以提高结构稳定性。

将样本转移至含有消化缓冲液（含去污剂）的离心管中。

孵育以促进组织分解，同时保持膜及包被中嵌入的蛋白质完整。

用缓冲液清洗以去除碎片。

加入封闭液以防止非特异性抗体结合。

加入针对目标神经元膜蛋白的特异性一抗。

用缓冲液洗涤以去除未结合的抗体。

孵育与一抗结合的金标二抗。

用缓冲液洗涤以去除过量的抗体。

用水冲洗，以防止显微镜观察时盐残留产生假象。

将样本装载到透射电子显微镜（TEM）载网上。

在透射电子显微镜下，观察由金颗粒标记的目标神经元膜蛋白，金颗粒呈现为黑色小点。

进行SDS消化时，将一份复制品转移至含有1毫升SDS消化缓冲液的4毫升玻璃小瓶中，在80摄氏度下振荡消化18小时。进行免疫标记时，先用新鲜的SDS消化缓冲液洗涤复制品10分钟，然后在湿润环境中，于15摄氏度下用含2% BSA的TBS稀释的一抗和二抗孵育24至72小时。

随后，将复型样品装载到经甲醛支持膜（formvar）包被的100目平行条纹网格上。使用透射电子显微镜在80或100千伏条件下对复型样品进行成像，并通过CCD相机采集数字图像。