氧糖剥夺与再氧合对细胞间相互作用的影响

取一个带有大鼠脑微血管内皮细胞（RBMECs）单层培养物的腔室载玻片。

这些细胞通过与肌动蛋白细胞骨架相连的紧密连接蛋白相互连接，模拟了血脑屏障的内皮层。

用无葡萄糖的去氧培养基替换原有培养基，然后将载玻片放入缺氧室中。

氧气和葡萄糖的缺乏会抑制ATP的合成，剩余的ATP则被分解为核苷酸衍生物。

ATP 耗竭会阻碍钙泵功能，导致细胞内钙离子浓度升高，从而激活氧化还原酶类。

接下来，加入含氧培养基，然后将玻片放入含氧培养箱中。被激活的氧化还原酶利用重新引入的氧气降解核苷酸衍生物，从而产生活性氧（ROS）。

ROS 会破坏紧密连接蛋白之间的相互作用，并激活信号通路，导致肌动蛋白细胞骨架重组成应力纤维，从而削弱细胞间的相互连接。

细胞间相互作用被破坏的单层细胞已准备好进行分析。

准备阶段，根据制造商说明书设置并校准缺氧细胞培养系统。培养箱内的环境应为95%氮气、5%二氧化碳，并保持在37摄氏度。随后，将无葡萄糖DMEM置于缺氧培养箱中4至6小时，以完成去氧处理。之后，通过将细胞培养基更换为已去氧的无葡萄糖DMEM开始对细胞施加应激，并将细胞放入缺氧培养箱中孵育2小时。2小时后，将细胞重新换回大鼠脑微血管内皮细胞完全培养基。然后，将细胞恢复至正常培养条件1小时，以实现复氧。