使用光敏染料诱导小鼠大脑中的血凝块形成

以一只具有颅窗和薄颅层的麻醉小鼠为例，以最小的侵入性实现大脑可视化。

在显微镜下，根据从大血管到小血管的血流识别动脉。

光敏染料注射到尾静脉中，通过循环到达大脑。

用光激发染料发出荧光，从而实现血流监测。

增加光强度以诱导凝块形成，称为光血栓形成。

染料吸收高强度光，与氧气反应，产生活性氧，从而损害内皮细胞。

受损的细胞释放介质，导致血小板粘附，启动凝块形成。血液中的纤维蛋白有助于捕获额外的血细胞，形成凝块。

之前染料的积累检测到的凝块会阻碍血液流向大脑。

闭合切口，使用抗生素预防感染，并给予镇痛药以减轻疼痛并允许康复。

小鼠置于显微镜下后，在人工脑脊液中以每毫升20毫克制备新鲜的孟加拉玫瑰。过滤器对混合物进行灭菌，实验完成后处理。它必须始终新鲜使用。

现在，在用 561 纳米激光扫描颅窗的同时，通过尾静脉注入 0.1 的混合物。在 5 秒内，应该很容易在颅脉管系统中看到染料。注入足够的染料后，选择一个 40 至 80 微米的血管进行血栓形成。动脉可以根据较大血管到较小血管的流量来区分动脉和静脉，反之亦然。

现在，准备对所选容器进行激光照射。将停留时间增加到适合所用系统的任何时间。将激光功率提高到 100%，并将图像采集设置为每秒一帧，扫描速度最大。扫描鼠标，直到形成订书钉凝块。通常这大约需要五分钟。理想情况下，只需扫描一个视野即可形成凝块。相应地选择目标。如果没有形成凝块，请尝试使用更多染料。

凝块形成，将鼠标从成像区域取出，准备在解剖显微镜下完成手术。首先，在检查是否有出血的同时小心地取下戒指。如果发生任何出血，则必须终止实验。

接下来，使用 6-0 缝合线，闭合切口。然后，在切口线上涂抹抗生素。为了缓解疼痛，皮下注射丁戊二烯三天。第一次注射丁甲酸后，将小鼠放入恢复室中并监测它，直到它可以走动。然后，将其放回应清洁的家笼子中。纵向成像在文本协议中有详细说明。