评估激光诱导脑损伤大鼠模型中的血脑屏障完整性

取一只麻醉后的对照组大鼠和一只激光诱导脑损伤的大鼠模型。

对右半球施加激光照射会损伤细胞以及血脑屏障（BBB），血脑屏障是分隔血液与脑组织的结构。

将示踪染料注入套管化的尾静脉，使其经体循环到达脑部。

染料与血浆蛋白结合，并通过受损的血脑屏障渗入脑组织。

处死大鼠。

通过心脏灌注大鼠，以清除循环中的染料。

取出脑组织并进行切片，分离损伤半球的脑片并进行匀浆处理。

用酸性溶液处理，使蛋白质变性，从而释放与蛋白质结合的染料。

离心并分离含染料的上清液。加入酒精以增强染料荧光。

将溶液转移至微孔板中。激发后，受损脑组织中较高的荧光强度表明激光诱导的血脑屏障损伤。

为了评估血脑屏障破坏的发生率，在激光损伤后24小时，用2%伊文思蓝染料（溶于4毫升/千克生理盐水）填充注射器，并通过插管的尾静脉将溶液静脉注射至损伤组和对照组大鼠体内。

在使用手术针具和剪刀打开第一只动物的胸腔之前，让溶液循环一小时。通过左心室以110毫米汞柱的压力灌注冷却的0.9%生理盐水，灌注暴露的心脏，直至右心房流出无色的灌注液。

接下来，取出脑组织，获取2毫米的前后切片。将左侧脑切片与右侧脑切片分开，以便分别评估损伤侧和非损伤侧半球，并称量样品。使用研钵和研杵匀浆样品，并将组织样品在50%三氯乙酸中孵育24小时。

第二天，将匀浆后的脑组织样本在室温下以10,000 × g离心20分钟。取1毫升上清液与1.5毫升96%乙醇按1至3的比例混合。然后，使用激发波长为620纳米、发射波长为680纳米的荧光检测器评估血脑屏障的破坏情况。