一种用于研究神经干细胞激活与迁移的最小化脊髓损伤模型

0 次观看4:30 分钟 • April 28th, 2025

取一只已麻醉的小鼠,剃除其背部毛发。

将其固定在立体定位仪中,并用卷好的纱布支撑胸椎。

对皮肤进行消毒,做一条垂直的正中切口,并牵开皮肤。

从胸椎上分离肌肉肌腱并将其牵开。

确定目标椎骨,然后切断椎间关节以将其移除。

暴露脊髓,并在中线两侧各插入一根弯针。

针头插入会在白质中造成浅表性损伤,白质是含有轴突束的脊髓外层,而中央管则保持完整。

移除针头,然后缝合肌肉和皮肤。

受损细胞会释放信号,激活组织驻留的免疫细胞,进而激活脊髓中央管周围神经干细胞(NSCs)。

活化的神经干细胞迁移到损伤部位,促进组织修复。

在开始操作前,使用毛发剪将麻醉小鼠从背部中段至颈部及耳朵区域的毛发剪除。将小鼠固定于立体定位仪后,在其腹部下方放置四到五团卷好的纱布,同时轻轻牵拉尾根部,以使身体和脊柱伸直。

将胸垫纱布卷从鼠腹部向头侧方向推至胸部上部,以支撑胸椎。使用实验室胶带将尾巴和四肢固定成星形分布。用70%乙醇和聚维酮碘棉签依次消毒暴露的皮肤后,使用10号手术刀片沿动物纵轴方向做垂直切口,切口从双侧肩胛骨中点延伸至胸椎弯曲处。

牵拉皮肤以暴露软组织和脊柱轮廓,并确定肩胛上脂肪垫的下缘。然后使用手术刀沿胸椎T5至T8和T9两侧用力而谨慎地切开,以分离背部肌肉腱膜与脊柱。重新放置牵开器,使牵开器的齿部插入脊柱两侧的切口位置,并逐步扩张牵开器以调节暴露程度,直至脊柱充分抬高,同时避免对牵开的肌肉层造成过大张力。

在手术显微镜下,小心清除覆盖在脊柱上的残留肌肉和其他软组织,以暴露椎体骨;用有齿镊夹住椎骨的棘突,并轻微上下移动镊子,以确定将要切除的椎骨。接着,将一对弯头钝头剪刀的一侧尖端插入待切除椎板下方暴露的椎间孔两侧,在椎板的尾侧切断双侧连接的椎间关节。然后,向上抬起椎板,切断椎板上方的附着部分,从而分离并移除该骨组织。

切除并移除椎板时,务必始终将剪刀向上倾斜,以免损伤下方的脊髓。

以背侧中线静脉作为解剖标志,将30号针头弯曲45度的针 shaft 以针尖斜面朝上的方向,插入脊髓背外侧表面,深度约为1毫米,位置位于中线左右两侧约0.5毫米处。从尾侧向头侧方向移动针头约2毫米,使针尖斜面的整个长度均进入脊髓组织。随后,沿原进针路径退出针头。

关闭伤口时,先移除牵开器,然后使用6-0可吸收缝线沿中线缝合损伤两侧的背部肌肉,并使用4-0丝线缝合表面皮肤。