Name: CD4 + T淋巴细胞艾滋病毒的捕获使用一次性微流体芯片 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T13:03:52.000+00:00
Duration: 12 min 44 s
Description: 了解如何使用一次性微流控芯片从患者血液中捕获CD4阳性T淋巴细胞。该方法采用PDMS材料制备精密装置，可在资源有限环境下实现T辅助淋巴细胞的高效定量分析。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol>
<li>制备具有抗 CD4+ 生物素化表面的微流控通道。</li>
<li>使用注射泵以 5 ml/min 的流速向微流控通道中注入 10 ml 样本血液。</li>
<li>以 20 ml/min 的流速用 PBS 冲洗血液，持续 20 分钟。</li>
<li>以 5 µl/min 的流速注入稀释后的 FACS 裂解液（用 PBS 将原液稀释至 10%），持续 15 分钟。</li>
<li>孵育 15 分钟。</li>
<li>以 5 ml/min 的流速注入初级 CD3+ 抗体溶液（用 PBS 将原液稀释至 10%），持续 20 分钟。</li>
<li>孵育 2 小时。</li>
<li>以 5 ml/min 的流速用 PBS 冲洗通道，持续 15 分钟。</li>
<li>同时以 5 ml/min 的流速注入 20% AF488 CD4+ 抗体、0.2% DAPI 原液以及 10% 二抗 CD3+ 抗体，持续 20 分钟。</li>
<li>孵育 20 分钟。</li>
<li>以 5 ml/min 的流速用 PBS 冲洗通道，持续 15 分钟。</li>
<li>在荧光显微镜下计数细胞：<ol>
<li>白光（光学）— 黑白图像：细胞和灰尘</li>
<li>紫外光（DAPI）— 蓝色：仅细胞</li>
<li>蓝光（CD4+）— 绿色：T 淋巴细胞和单核细胞</li>
<li>绿光（CD3+）— 红色：仅 T 淋巴细胞</li>
</ol></li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>PDMS 微通道</td><td></td><td></td><td></td><td>由SU-8模具制备</td></tr><tr><td>血液</td><td></td><td></td><td></td><td>来自正常人类受试者的献血。麻省总医院，10倍高密度白细胞或布莱根妇女医院&amp;rsquo;医院</td></tr><tr><td>PBS</td><td>缓冲液</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td>1x 达尔伯克&amp;rsquo;磷酸盐缓冲液。</td></tr><tr><td>FACS 溶血溶液</td><td></td><td>BD 生物科学</td><td>349202</td><td>用PBS将储备液稀释至10%。</td></tr><tr><td>抗CD4+生物素标记抗体</td><td></td><td>贝克曼库尔特公司</td><td>IM0704</td><td>用PBS/BSA将储存液稀释10倍制备表面，其中储存液由0.2 mg储存品与1 ml去离子水混合后，再与生物素标记的抗CD4+抗体混合而成。 </td></tr><tr><td>山羊抗人CD3δ</td><td>pAB</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-1128</td><td>用 PBS 将原液稀释至 10%</td></tr><tr><td>兔抗山羊IgG PE</td><td></td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-3755</td><td>二抗（抗CD3抗体），用PBS将储备液稀释至10%</td></tr><tr><td>抗人 CD4+</td><td></td><td>BD 生物科学</td><td>557695</td><td>Alexa Fluor 488 标记，用 PBS 将储备液稀释至 20% </td></tr><tr><td>DAPI</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td>4&amp;rsquo;6-二氨基-2-苯基吲哚二盐酸盐溶液，用PBS稀释至0.2%（由原液稀释）</td></tr></tbody></table>

使用一次性微流控芯片捕获cd4+ t淋巴细胞用于hiv研究

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

使用一次性微流控芯片捕获CD4+ T淋巴细胞用于HIV研究

您好，我叫Richard Lin，是哈佛大学与麻省理工学院健康科学与技术部TI Mercy教授团队的一名研究人员。我正在开展的项目是定量并捕获患者血液中的CD4阳性与CD3阳性T淋巴细胞，该技术将应用于资源有限的医疗环境。如图所示，我面前有一个由聚二甲基硅氧烷（PDMS）制成的微填充装置。该装置的通道本身高为50微米，总体积为10微升。这是一个极为精密的装置，我们将用它来捕获辅助性T淋巴细胞。基本上，这是针对 HIV 患者的诊断基准。微流控装置的表面已预先固定了蛋白质和 CD4 阳性抗体，注射器中目前装有 pH 为 7.4 的 PBS 生物缓冲液。接下来，我们将把缓冲液注入通道，以冲洗掉未结合的 CD4 阳性抗体。在此阶段，流速无需控制，因为我们只是要冲洗掉多余的物质，流速的具体数值并不重要。此处将是装置的入口，而这里则是出口，即我的左侧、你们的右侧。现在我将冲洗掉多余的抗体溶液，如果仔细观察出口处，可以看到液体正在流出，虽然量非常少，但仔细看可以发现空气和液体正通过管路从通道中流出。现在我们已经冲洗掉了多余的抗体溶液，接下来可以准备注入血液。现在我将拔下入口处的管路，打开一支新的注射器来装血液，即人全血。因此，这不是患者样本，而是健康个体的样本，我们在准备将血液注入微流控装置之前使用该样本。接下来，我们将注射器连接到注射泵上。现在启动设备，您可以看到注射器的流速，我们已将其设定为每分钟5微升。现在，我们基本上要准备向血液中注射。我们将注射器泵垂直放置，因为众所周知，血细胞会沉降，我们需要让细胞流入通道内。因此，最好让细胞沉降到靠近管路的底部。现在所有设置均已准备就绪。我的装置体积为每10微升10微升。我们希望流入通道壁的体积也是10微升。因此，我可以通过观察通道的颜色来判断是否已注入足够的血液：如果通道完全充满红色，则说明已注入10 µL，此时应停止推动注射器推杆。现在我将按下启动按钮，设备有时会立即开始运行，但有时需要一段时间血液才会真正进入通道，这在很大程度上与压力有关。例如，当我们把注射器安装到位后，有时需要相应地回抽或注入液体，以调节管路中的血液。因此可能需要一些时间，但一旦血液开始泵入通道，流速就会稳定在每分钟设定的数值，这正是我们期望的。所以我们需要稍有耐心，等待一段时间，有时可能需要等待两到三分钟，血液才会开始进入通道。实际上，你现在可以看到血液正开始进入通道。因此你可以判断，目前该装置几乎已完全充满。好的，现在我们将管路切换回 PBS，以冲洗通道中的血液。为此，我们将重复之前移除管路的操作步骤。由于仍需控制 PBS 的流速，因此仍需使用注射泵。然而，由于不再灌注血液，PBS 中不含细胞，因此无需将注射泵保持在垂直位置。现在我们已准备就绪，接下来将冲洗掉装置中的血液，我将再次按下此处的锐器按钮。正如您所见，装置正逐渐开始变得清晰，边缘还残留少

cd4-t-lymphocyte-capture-using-a-disposable-microfluidic-chip-for-hiv

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

CD4 + T淋巴细胞艾滋病毒的捕获使用一次性微流体芯片

使用微流控装置捕获细胞

本可视化实验旨在指导如何利用荧光标记的HIV分子克隆进行活细胞共聚焦成像实验。...

利用荧光标记的HIV克隆与活细胞共聚焦显微镜观察HIV的细胞间传递

我们开发了一种慢病毒载体，该载体除了具有Tat响应性LTR外，还含有Rev响应元件（RRE），能够以HIV-1...

利用表达绿色荧光蛋白的Rev依赖型慢病毒载体特异性标记HIV-1阳性细胞

已开发出一种用于分子诊断的集成化微流控热塑芯片。该芯片可进行核酸提取、逆转录和聚合酶链式反应（PCR）。文中描述了该芯片的制备与运行方法。...

微流控芯片的制备及流感检测方法

本文介绍了一种用于单细胞分析的微流控芯片。该芯片可通过荧光检测或免疫检测方法，对细胞内蛋白质、酶、辅因子和第二信使进行定量分析。...

一种用于单细胞多功能化学分析的微流控芯片

本方案描述了构建人源化骨髓/肝/胸腺小鼠模型的方法，该模型基于干细胞工程技术，可产生针对HIV感染的免疫反应。...

基于干细胞的工程化免疫系统在人源化小鼠模型中抵抗HIV感染

本文描述了一种在单细胞水平上对外周血单个细胞（ex vivo）同时定量96个基因和18种表面蛋白表达水平的方法，可用于鉴定病毒感染细胞与未感染细胞之间差异表达的基因和蛋白。我们应用该方法研究从中国台湾恒河猴中分离的SIV感染的CD4+...

从恒河猴中分离的猴免疫缺陷病毒感染的 CD4+ T 细胞中 mRNA 和表面蛋白表达的单细胞定量分析

本文介绍了一种荧光成像方法的实验方案，即多重免疫荧光细胞检测法检测DNA、RNA和蛋白质（MICDDRP），该方法能够同时在单细胞水平上以荧光方式可视化不同种类和链型的病毒蛋白及其核酸。该方法可广泛应用于多种研究体系。...

单细胞多重荧光成像技术用于可视化病毒核酸与蛋白质并监测HIV、HTLV、HBV、HCV、寨卡病毒和流感病毒感染

本文介绍了一种在纳米流体装置上对单个细胞进行监测以研究急性事件及有效的HIV-1感染的实验方案。成像数据可明确病毒与宿主受体之间的相互作用以及信号通路的动力学变化。这是首个用于高通量、纵向单细胞培养与成像的纳米流体技术方法，可用于研究信号动力学和分子相互作用。...

基于多参数光流控平台的单细胞钙离子内流与HIV-1感染表征

临床微流控芯片是一种重要的生物医学分析技术，可简化临床患者血液样本的预处理，并对循环肿瘤细胞（CTCs）进行免疫荧光染色 原位...

用于分离多种循环肿瘤细胞的临床微流控芯片平台

循环肿瘤细胞（CTCs）对于癌症进展和转移的研究至关重要。本文介绍了一种高通量、一体化的CTC富集与单个CTC测序方案，在提高捕获效率和CTC纯度的同时，降低了污染风险和测序成本，从而推动了精准肿瘤学研究及临床应用的发展。...

基于微流控的高通量循环肿瘤细胞分选与单细胞测序技术

了解如何使用一次性微流控芯片从患者血液中捕获CD4阳性T淋巴细胞。该方法采用PDMS材料制备精密装置，可在资源有限环境下实现T辅助淋巴细胞的高效定量分析。

使用一次性微流控芯片捕获CD4+ T淋巴细胞用于HIV研究

探索更多视频