脑肿瘤神经球切片中生物标志物的免疫组织化学染色

取一张载玻片，其上含有脑肿瘤神经球的石蜡包埋切片，这些神经球是表现出肿瘤特异性核蛋白生物标志物的神经干细胞簇。

加热使石蜡融化，用二甲苯去除石蜡，并通过逐渐降低浓度的酒精对组织进行复水。

在含有去垢剂的酸性缓冲液中加热，以暴露生物标志物上的抗原表位并通透细胞膜。

漂洗，然后用氧化剂处理以灭活内源性过氧化物酶，防止非特异性信号产生。

加入封闭液以封闭非特异性结合位点。

用针对生物标志物表位的一抗进行孵育。

漂洗，然后加入与一抗结合的生物素标记的二抗进行孵育。

用辣根过氧化物酶标记的亲和素进行洗涤并孵育，该亲和素可与生物素结合。

加入显色底物和氧化剂。

过氧化物酶利用该试剂将底物转化为有色沉淀，从而标记生物标志物的位置。

对细胞核进行复染，用酒精脱水组织，然后封片以进行生物标志物分布的成像。

首先，将切片置于金属架中，在 60 摄氏度下孵育 20 分钟以熔化石蜡。然后根据 Tex 方案，在室温下将切片放入复水梯度溶液中孵育以脱蜡。将切片保存在自来水中，以防止非特异性抗体结合。随后，将切片在柠檬酸缓冲液中于 125 摄氏度孵育 30 秒，再于 90 摄氏度孵育 10 秒。孵育后让切片冷却，然后用蒸馏水冲洗五次。

接下来，在室温下将切片置于0.3%过氧化氢中孵育20分钟。然后用洗涤缓冲液轻轻振荡洗涤切片，每次5分钟，共洗涤三次。将切片与稀释的一抗在4摄氏度的湿化 chamber 中孵育过夜。之后，用洗涤缓冲液轻轻振荡洗涤切片，每次5分钟，共洗涤三次。

接下来，将切片在稀释的生物素化二抗溶液中室温孵育一小时。用洗涤缓冲液轻轻振荡洗涤切片三次，每次五分钟。然后，将切片置于避光条件下，室温孵育一小时，使用亲和素-生物素化辣根过氧化物酶复合物。重复上述洗涤步骤。之后，将切片在室温下与DAB过氧化氢底物显色液孵育两至五分钟。

用自来水冲洗载玻片，然后将载玻片浸入苏木精溶液中进行复染。接着用自来水彻底冲洗载玻片，直至流出的水变清澈。根据Tex方案对载玻片进行脱水。最后，用二甲苯基封片介质封片，并将载玻片平放在室温下晾干。