透明化小鼠海马组织中星形胶质细胞与兴奋性神经元的双光子显微成像

从经过清除脂质处理而呈现光学透明的小鼠海马组织开始。该组织被包埋在水凝胶网格中，以稳定生物分子并保存细胞结构。

该组织包含表达红色荧光蛋白的星形胶质细胞和表达绿色核蛋白的兴奋性神经元，可实现清晰的区分观察。

将组织放置在载玻片上，用热熔胶创建一个腔室，留出一个小缝隙。

使用折射率匹配溶液浸润组织以防止产生气泡，然后加盖盖玻片进行封片。

向腔室内填充折射率匹配溶液，以减少光散射并封闭间隙。

使用双光子显微镜观察组织。

近红外光在焦平面处激发红色和绿色荧光蛋白，从而实现高分辨率成像，并将光损伤降至最低。荧光发射被分别检测，清晰地揭示了星形胶质细胞与兴奋性神经元细胞核之间的空间邻近关系。

首先，将样品置于载玻片中央。使用热熔胶在载玻片边缘构建围壁，高度接近组织样本。确保其中一个角落留出小缝隙。当热熔胶层接近脑片高度时，在样品上滴加一至两滴折射率匹配溶液，以润湿样本上表面并防止气泡形成。

在热熔胶仍处于液态时，用盖玻片将其顶部密封，尽量使其放置均匀。然后，向腔室内加入折射率匹配溶液。用热熔胶封闭缝隙。如果热熔胶形成的壁超出载玻片的边界，需剪去延伸出的边缘部分。若使用油浸物镜进行成像，需在盖玻片上方的壁上再添加两到三毫米的胶，以防止浸油溶液流失。完成本方案后，脑组织将实现透明化。