使用共聚焦显微镜监测斑马鱼激光消融后中间神经丘细胞的恢复

从一只携带荧光标记的中间神经丘细胞（INMCs）的斑马鱼幼体开始，将其固定在盖玻片上，并置于共聚焦显微镜下。

INMC 是具有再生能力的前体细胞，此前已接受过激光消融处理。

首先，在荧光模式下观察受损区域。荧光的缺失证实激光消融已成功。

接下来，使用透射光成像模式观察受损区域，其中细胞呈现颗粒状、肿胀且细胞核不规则，以此确认细胞死亡。

巨噬细胞被募集到损伤部位表明机体对损伤产生了活跃的细胞反应。

现在，切换回荧光模式，并定期捕获时间序列图像以监测恢复情况。

在恢复阶段，INMCs 会向间隙延伸突起，促进间隙闭合并推动细胞修复。

将这些时间序列图像保存以供分析。消融区域中明显荧光的重新出现表明细胞已成功恢复。

在消融后对细胞体进行成像时，在“通道”菜单下取消勾选 DAPI 轨道以关闭消融激光，并打开采集模式菜单。点击“缩放”并将缩放倍数降低至 0.7。

为了评估细胞消融的效果，快速扫描视野。使用与消融前成像相同的设置，采集并保存消融后的图像。检查透射光光电倍增管通道的图像，以进一步确认细胞损伤情况。受损细胞将呈现颗粒状外观，细胞核常出现肿胀或形态不规则。

为了评估消融后的细胞体恢复情况，启动载物台位置和时间选项以进行延时成像，并将时间参数设置为适当的实验时间点及15分钟的时间间隔。然后开始实验以采集图像，并在完成后保存生成的文件。