0 次观看 • 3:34 分钟 • May 29th, 2025
从预先固定的扁平化脑皮层切向切片开始。洗涤以去除固定剂残留。
使用二氨基联苯胺（DAB）与硫酸镍铵溶液对切片进行染色。
DAB扩散至皮层神经元中，与线粒体内的细胞色素氧化酶反应，形成深色沉淀物。硫酸镍铵可使该沉淀物颜色加深，从而增强对比度。
加入多聚甲醛以终止染色反应，然后冲洗。
将切片置于载玻片上，并用乙醇洗涤脱水。
用异丙醇和二甲苯冲洗切片，以清除杂质并提高透光性。
加入封片剂，并盖上盖玻片。
在明场显微镜下观察时，皮层神经元内的沉淀物会吸收并散射光线，因而呈现为暗色。
相比之下，未染色的透明区域可透光，呈现明亮状态。
这种对比使皮层模块在较亮的背景上呈现出暗色、斑驳的结构，代表参与感觉信息处理的活跃神经元集群。
用HEPES缓冲液轻轻振荡洗涤组织切片15分钟。在洗涤过程中，配制新鲜的细胞色素氧化酶染色液，并在使用前立即加入DAB组分。随后，将切片置于新配制的染色液中，在室温下用摇床孵育，并密切观察。根据固定程度的不同，染色可能在10分钟内即可观察到，也可能需要数小时。
如果反应过慢，可将温度升至37摄氏度。为终止反应，将切片转移至含4% PFA的溶液中，室温下轻轻振荡孵育15分钟。随后用HEPES缓冲液洗涤切片三次，每次10分钟。
现在，将切片置于载玻片上并进行干燥，随后使用浓度递增的乙醇溶液进行脱水。然后，将载玻片用异丙醇洗涤5分钟，再用二甲苯洗涤5分钟。二甲苯处理后，立即加入快速硬化、非水性封片剂。水性封片剂会破坏染色效果。加盖盖玻片后，将载玻片置于4摄氏度保存，直至成像。