转导小鼠胚胎脑切片中皮层神经元径向迁移的延时成像

取一个含有经转导的小鼠胚胎类器官脑片的膜插件，其中神经元和放射状胶质细胞表达荧光蛋白，从而能够对其进行可视化观察。

利用荧光显微镜，选择一个具有荧光标记的皮层神经元沿着完整的放射状胶质支架向切片软脑膜表面进行径向迁移的脑片。

将带有选定切片的膜插件转移至含有培养基的玻璃底培养皿中，以在成像期间维持细胞活性。

将培养皿放入倒置共聚焦显微镜的气候控制腔室中，以确保细胞活性。

调整成像参数以获取清晰图像，同时尽量减少光损伤。

接下来，在目标区域配置Z轴层扫描以可视化细胞结构。

以固定时间间隔开始延时成像。

分析图像，评估皮层神经元从脑室下区沿放射状胶质支架向皮层板的径向迁移，以揭示神经元迁移模式。

通过倒置显微镜观察脑片，选择用于成像的脑片。应选择上部室下区（SVZ）具有明亮单个神经元、且神经元正沿径向向脑片软脑膜表面迁移的脑片。

贯穿整个皮质板的放射状胶质细胞的细长荧光突起的存在，表明放射状胶质支架结构完整，可为迁移的皮质神经元提供引导。

将带有选定脑片的膜插件转移至含有 2 毫升脑片培养基的 50 毫米直径玻璃底培养皿中。将培养皿放入共聚焦显微镜的环境培养箱内。

将分辨率设置为 512 × 512 像素。将扫描速度从 400 赫兹提高到 700 赫兹，以将帧率从约 1.4 提高到约 2.5 帧每秒。平均次数不超过两次。

通过电穿孔区域定义一个Z轴层扫描，步长为1.5 µm。每30分钟获取一次Z轴层扫描，开始时间序列成像。所述设置可在采集过程中保持较低的光损伤，同时实现图像足够的分辨率和亮度。