小鼠脑内脑海绵状血管畸形病变的增强对比微计算机断层成像

取一个经化学固定的、具有脑海绵状血管畸形（CCMs）的小鼠幼崽脑组织——即充满淤积血液的异常血管簇。

分离后脑，用缓冲液冲洗，并在含碘染色液中孵育。

碘可穿透脑海绵状血管畸形（CCM）区域的通透性血管，与血液成分结合，从而增强病灶的对比度。

将组织风干以去除多余的染色液。

将组织放入试管中并密封，以防止组织收缩。

用海绵将小管固定在较大的管内，并将其垂直安装在微CT支架中。

开始扫描。

X射线源发射出穿透组织的集中X射线。

碘染色区域比周围组织吸收更多的X射线。

探测器记录透射的X射线，生成的图像中CCM显得更亮。

该系统旋转组织，从多个角度捕获二维图像。

专用软件将这些图像重建为三维模型，揭示脑内CCM的位置。

开始样品制备：取一支10毫升注射器，安装29号针头，吸入3毫升含2%多聚甲醛的PBS溶液。然后对一只已处死的P8幼鼠进行心脏灌注，将针头插入小鼠心室，缓慢注入全部体积的多聚甲醛溶液。

用剪刀取下头部后，去除头部皮肤并剥离颅骨，用镊子将整个脑组织分离出来，放入含4%多聚甲醛的PBS溶液中。在4摄氏度下固定脑组织过夜。次日，用镊子分离出后脑，并用PBS溶液冲洗。

然后，将小脑在卢戈氏碘液中孵育48小时。孵育结束后，将小脑短暂地在空气中干燥，以去除多余的卢戈氏碘液。接着，将经卢戈氏碘液染色的小脑装入0.65微升的微量离心管中，并用塑料石蜡膜完全密封，以防止组织收缩。将微量离心管放入装有海绵的5毫升塑料管中，以防止扫描过程中发生移动。

将含有后脑的试管垂直安装在微计算机断层扫描（micro-CT）系统的铝制支架上。设置扫描参数：采用50千伏和10瓦的源条件，曝光时间为2秒，共采集540个投影，以获取断层数据集。扫描仪采集的放射图像由微CT系统提供的基于硬件的投影重建软件自动重建，生成16位轴向切片的图像序列。