0 次观看 • 3:16 分钟 • May 29th, 2025
取自幼鼠脑中分离的少突胶质前体细胞（OPCs）培养物，该细胞已诱导分化为少突胶质细胞。细胞经过固定以保存其细胞结构。
分化的少突胶质细胞表达髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein，MBP），这是成熟少突胶质细胞的标志物，而少突胶质前体细胞（OPCs）和分化细胞均表达少突胶质细胞转录因子2（oligodendrocyte transcription factor 2，Olig2）。
加入通透-封闭液，振荡孵育，使细胞膜通透并封闭非特异性结合位点。
加入针对标记物的一抗并轻轻振荡孵育，以促进结合。
洗涤以去除未结合的抗体，然后加入针对一抗的、不同荧光染料标记的二抗，在振荡条件下孵育。
洗涤细胞，然后将其置于双荧光成像系统中。
使用特定波长的光激发不同的荧光染料，并检测发射的信号以观察标记物。
在仅表达 olig2 的未分化 OPCs 中识别出表达 olig2 和 MBP 的已分化少突胶质细胞。
将培养板恢复至室温。吸去各孔中的液体，加入含有5% NGS和0.1% Triton X-100的250微升DPBS。在室温下轻轻振荡孵育一小时。通过将小鼠单克隆抗MBP抗体和兔多克隆抗OLIG2抗体稀释于含5% NGS的DPBS中，制备一抗孵育液。随后，在4摄氏度下轻轻振荡孵育一抗16至18小时（过夜）。
洗涤平板的同时，将抗小鼠680和抗兔800抗体用含5% NGS的DPBS稀释，配制二抗孵育液。随后吸除最后一次洗涤液，每孔加入250微升二抗孵育液。避光条件下，室温轻柔振荡孵育一小时。
随后，使用能够检测 700 纳米和 800 纳米荧光发射的成像系统扫描平板。作为起始设置，将焦平面偏移设为 3，MBP 的灵敏度设为 1.5，肌动蛋白（actin）设为 5.0，OLIG2 设为 3.5。根据需要调整灵敏度数值，以避免信号过曝。