离体钙成像研究Drosophila脑对神经肽的反应

从一个成像室开始，其中包含固定在缓冲液中的果蝇（Drosophila）脑组织外植体，以维持细胞功能。

大脑中的神经元表达细胞质荧光钙指示剂，该指示剂可与钙离子结合并发出荧光。

将成像室置于配备水浸物镜的荧光显微镜下。

降低物镜，在明场照明下聚焦于脑组织。

切换至荧光模式并采集图像。

接下来，将神经肽加入缓冲液中，并启动延时记录。

神经肽与其神经元上的受体结合，触发细胞内信号传导。这会打开钙通道，允许钙离子内流。

这些钙离子与指示剂结合，并增强荧光强度。

在神经肽刺激后重新捕获图像。

比较神经肽刺激前后图像的变化。

神经肽刺激后荧光强度的增加反映了果蝇（Drosophila）大脑对神经肽信号的响应。

为了获取钙荧光图像，将含有脑组织外植体的成像腔置于显微镜下。降低物镜直至其接触 PBS。在明场照明下，定位脑组织并调节至清晰对焦。

切换至荧光光源，并调节GCaMP6标记细胞的焦距。以水冷模式进行成像，每帧250毫秒，分辨率为512×512像素，开始采集图像。随后调整曝光时间，使荧光信号值处于CCD相机的动态范围内，但对于16位图像，信号强度不应低于1,000个任意单位。

确定成像参数后，在给予肽之前先进行一分钟成像，以检测基线信号强度。随后，通过移液将100微升配制好的肽溶液直接加入幼虫浴液中，施加待测肽。继续记录数分钟的GCaMP6发射信号。