小鼠脑切片中室管膜细胞纤毛活动的活体成像

取小鼠脑的矢状切面以暴露脑室，脑室是充满脑脊液（CSF）的腔隙。

衬于脑室壁的室管膜细胞具有可动纤毛，可推动脑脊液以促进其循环。

将切片置于含有营养丰富培养基的玻璃底培养皿中，以维持纤毛活性。

将培养皿转移至微分干涉差（DIC）显微镜的温控培养室中，以在成像过程中维持细胞活性。

微分干涉相差显微镜利用棱镜将偏振光分裂，并沿不同路径引导其通过样品。

样品中折射率的变化会在光束之间引入相位差。

第二个棱镜将光束重新合并，产生干涉，从而形成具有三维效果的高对比度图像，增强细微结构的可见性。

通过观察由纤毛摆动产生的气泡移动来定位具有活动纤毛的功能性室管膜细胞。

利用高对比度微分干涉相差成像，记录纤毛运动以量化其摆动频率。

为了成像，将脑切片置于含有1毫升高葡萄糖培养基的30毫米玻璃底培养皿中，并使用60倍油浸物镜，将显微镜密闭腔室环境调节至37摄氏度和5%二氧化碳。

接下来，将注意力集中在具有正常微分干涉差（DIC）透射光的细胞上。然后，以DMEM气泡移动的方向作为脑侧脑室中运动性室管膜纤毛位置的指引，使用DIC滤镜选择含有健康且具有运动性纤毛细胞的区域。在识别出室管膜纤毛后，调节光照并调整焦距，以获得满意的图像。

接下来，在成像软件中设置活体成像参数。例如，此处采集的是24位图像，相机 binning 设置为1乘以1，结合60倍物镜，曝光时间为5至10毫秒。

将显微镜光圈调整至最佳水平，以实现最短曝光时间，并采集微分干涉差（DIC）图像。观察实时传输到相机的动态图像，以实现快速、即时的图像采集，无延迟。随后可根据获得足够图像对比度所需的最短曝光时间来计算纤毛摆动速度。