转染小鼠原代大脑皮层细胞的延时成像

取一个涂有聚合物的多孔板，其中含有小鼠胚胎原代大脑皮层细胞，例如前体细胞和神经元细胞。前体细胞经过转染以表达荧光蛋白，用于标记和示踪。

将培养板转移至倒置荧光显微镜的预热孵育腔内，以获得稳定的成像环境。

在培养板上确定参考位置，以确保成像位置的一致性。

在较高放大倍数下，为每个孔选择多个成像视野，以最大程度提高观察到转染细胞的可能性。

定期同时采集相差图像以显示细胞形态和动态变化，以及荧光图像以监测荧光蛋白的表达。

通过比较延时相差图像和荧光图像，追踪前体细胞的分裂及其向神经谱系的分化过程。

为了成像逆转录病毒转导的细胞，将组织培养板放入与温度和二氧化碳控制器相连的成像腔室中，以维持细胞在37摄氏度和5%二氧化碳的恒定条件下。

选择XY轴上的一个位置作为零点，并对零点进行校准。每孔选择10至15个成像位置，在10倍放大倍数下进行成像。将软件设置为每5分钟获取一次相差图像，每3小时获取一次荧光图像，以降低光毒性。在实验开始的前3小时内检查并调整焦距，因为在温度达到平衡的过程中焦距可能会发生变化。