自由活动小鼠中的实时微型内窥镜钙成像

从一只固定在移动笼系统中的麻醉小鼠开始。

小鼠预先植入了梯度折射率透镜，靶向大脑杏仁核，该区域神经元表达钙敏感的荧光蛋白。

为保护起见，镜头表面被覆盖。

让小鼠苏醒，然后施加气流以实现无摩擦的笼子旋转。

取下镜头盖，并将微型显微镜置于脑组织上方。

打开显微镜的LED灯，然后调整显微镜位置，使物镜位于视野中央。

捕获镜头图像并调整显微镜位置。

当笼子旋转时，小鼠腿部的运动会产生恐惧，从而刺激杏仁核神经元。

这会引发钙离子内流，钙离子与荧光指示剂结合。

LED 光激发这些与钙结合的指示剂，使其产生荧光。

梯度折射率透镜可高效捕获并传递该荧光至显微镜。

这使得对杏仁核神经元活动进行实时钙成像成为可能。

为了评估GRIN透镜植入的质量，将麻醉后的小鼠置于移动式鼠笼系统的头杆上，并在其下方放置一个碳笼，然后打开气流，使笼子能够无摩擦地自由移动。使用显微镜夹持器和立体定位仪将微型显微镜垂直对准框架，随后降低显微镜，直至在软件的成像视野中出现植入的GRIN透镜表面。将植入的GRIN透镜中心与视野中心对齐，并采集GRIN透镜表面的图像。接着，在显微镜软件中观察图像，缓慢抬升显微镜的物镜，以寻找表达GCaMP的细胞。