使用扫描电子显微镜观察小鼠脑脉络丛

0 次观看2:23 分钟 • June 17th, 2025

用标本篮从鼠脑中取出脉络丛。

位于脑室内的组织含有一层上皮细胞,其顶端表面具有微绒毛。

将组织置于固定液中孵育,以保存其细胞结构。

用缓冲液洗涤以去除多余的固定剂并稳定 pH 值。

将组织与四氧化锇孵育,后者可结合细胞膜脂质,从而保持膜的稳定性,然后洗去多余的试剂。

使用浓度递增的酒精对组织进行脱水,以防止成像过程中组织发生变形。

将组织干燥,固定在碳涂层的样品台上,然后镀上一层导电的铂层。

利用扫描电子显微镜,将电子束聚焦于样品表面。铂层可分散电子,防止电荷积聚,并最大限度减少成像伪影。

探测器捕获从表面背散射的电子,生成显示具有微绒毛的上皮细胞的组织图像。

为进行扫描电镜样品制备,将新分离的脉络丛转移至新配制的固定液中,在4摄氏度下孵育过夜。完成后,使用3至5毫升0.1摩尔的卡考基酸钠缓冲液,每次5分钟,清洗样品三次。

将样品置于 3 至 5 毫升含 2% 四氧化锇的 0.1 摩尔二甲胂酸钠缓冲液中后固定 30 分钟。随后使用 3 至 5 毫升超纯水洗涤样品三次,每次 5 分钟。接着将样品依次置于冰浴条件下浓度递增的乙醇溶液中进行脱水,每种乙醇溶液处理 15 分钟。使用临界点干燥仪对样品进行彻底干燥。将样品小心地用碳导电胶固定于样品台上,随后利用扫描电镜(SEM)观察脉络丛样品。