清醒大鼠中用于精确定位神经活动的紧密细胞记录与染色技术

从一只被固定在实验装置中且头部被牢固固定的清醒大鼠开始。

打开先前植入的记录腔，并移除覆盖的硅胶。

清除任何再生的组织以暴露脑部。

加入一滴生理盐水以保持水合状态。

接下来，将一支预先装有芝加哥蓝染料的记录电极连接到显微操作器上。

将移液管缓慢放入记录室，直至到达目标脑区。

移液管与神经元接触，并记录神经元的信号，但不穿透神经元。

将这些神经元信号作为可听见的咔嗒声进行监听，然后通过移液管传递电脉冲。

这些脉冲将染料注射到神经元附近，从而实现对目标脑区的精确染色。

这些细胞外紧贴记录与染色技术能够精确可视化记录位点，并实现神经活动向脑解剖结构的准确映射。

将大鼠放入布制袜套中，然后将布套转移至实验支架上的刚性管内。将大鼠头部固定板与支架上的对应部件连接。接着，将一个832螺母安装在植入大鼠体内的头部固定螺栓上。

随后，将一根带螺纹的不锈钢螺杆拧入头部螺栓。接着，打开记录室并移除硅胶。如果颅骨开窗处有组织再生，使用精细镊子清理颅骨开窗区域。如有必要，此过程中可使用异氟烷麻醉。

接下来，将移液管连接到电动显微操作器上。将移液管移动至前、后及内侧-外侧轴向上的目标记录位置。然后将移液管向腹侧推进，穿过硬脑膜，直至其位于目标记录位置背侧约500微米处。在推进移液管的同时，通过音频监视器监听放大电压信号中的放电事件。一旦检测到放电事件，继续缓慢移动移液管约0至100微米，直到正向电压偏转幅度超过约500微伏。

为了标记记录位点，将电流源设置为负4微安，以50%占空比施加持续2秒的脉冲，持续4分钟，通过移液管电泳注入芝加哥蓝染料。