Drosophila 胚胎运动神经元轴突投射模式的可视化

从含有晚期16阶段的试管开始 果蝇 封片剂中的胚胎。

运动神经元 黑腹果蝇 进行免疫标记。

将胚胎转移至载玻片，并从封片介质中取出。

然后将胚胎腹侧朝上放置并进行解剖。

将包含运动神经元的前部切片腹侧朝上放置。

使用钨针沿背侧中线切开并展开体壁。将胚胎移入封片介质中。然后去除内脏器官，以暴露标记的

神经元。

将胚胎转移至新的载玻片，然后封片并密封。

在微分干涉相差显微镜下观察，当光线穿过胚胎时，可生成高分辨率图像。

具有轴突投射模式的标记神经元在浅色背景上呈深棕色。

运动神经元分支为两条主要神经：节间神经和节段神经，以及一条较小的分支——横神经，后者支配肌肉。

为了解剖胚胎，将胚胎置于载玻片上进行分期

首先，将它们移入一滴甘油中，腹面朝上。接着，在解剖显微镜下，于体长四分之一处剪去前端部分，并移除不含运动轴突的最末端区域。

现在，使用针状探针将标本从甘油中移出，保持背侧朝上，并将其水平放置于视野中。下一步需要一根细的钨针，该钨针已插入针状探针的中空部分，并在末端弯曲。使用钨针在胚胎后端做一小切口，然后沿背侧中线继续切割。

确保钨针的尖端在解剖过程中不接触玻片表面，因为针尖容易因接触玻璃而弯曲。

然后用探针将标本移回甘油滴中，并使其背面向上。在此位置，将每侧体壁向腹外侧展开，从而使其与体壁分离。两侧体壁应完全分开。现在用探针小心地将体壁瓣转移至载玻片上。在载玻片上，使用钨针将内脏器官向侧方推挤，以去除内部器官。

为稳定钨针并防止其受损，在操作钨针时，应使固定钨针的空心针探头紧靠玻片表面支撑。

现在将样品与8 µL封片液置于新的载玻片上，盖上盖玻片，并用普通指甲油密封边缘。然后，使用微分干涉差（DIC）光学系统以高分辨率采集图像。