果蝇胚胎运动神经元轴突投影模式的可视化

从在封固培养基中装有晚期 16 果蝇胚胎的试管开始。

果蝇的运动神经元是免疫标记的。

胚胎转移到载玻片上并将其从封固剂中取出。

然后，将胚胎腹侧朝上并解剖。

包含运动神经元的前部背面朝上。

使用钨针，沿着背中线切割并展开体壁。将胚胎移入封固剂中。然后，去除内脏器官以暴露标记的

神经元。

胚胎转移到新的载玻片上，然后安装并密封。

在微分干涉对比显微镜下观察光线穿过胚胎，生成高分辨率图像。

具有轴突投影图案的标记神经元在浅色背景上呈深棕色。

运动神经元分支成两条主要神经：节间神经和节段神经，以及支配肌肉的小分支，即横神经。

要将胚胎切成薄片，请将它们放在载玻片上

首先，将它们移至一滴甘油腹侧朝上。接下来，在解剖显微镜下，在体长的四分之一处切掉前部。并去除最后部的区域，该区域没有运动轴突。

现在，使用针探针，将制剂从甘油中移出，背面朝上，并将其水平放置在视野中。下一步需要将一根细钨针插入针探头的空心区域，然后在末端弯曲。使用钨针，在胚胎的后端做一个小切口，然后继续切下背中线。

解剖过程中确保钨针的尖端不要接触载玻片表面，因为针头很容易弯曲到玻璃上。

然后使用探针，将制剂放回甘油滴，并将其背面朝上放置。在那里，通过向腹侧横向展开每个体壁，将肠道与体壁分离。两面体壁应该分开。现在使用探头，小心地将体壁皮瓣移动到载玻片上。在载玻片上，用钨针横向推动内脏器官去除内脏。

为了稳定钨针并防止其损坏，在纵钨针时将固定钨针的空心针探针固定在载玻片表面上。

现在将制剂和 8 微升封片溶液安装在新的载玻片上。贴上盖玻片，并用普通指甲油密封边缘。然后，使用 DIC 光学器件捕获高分辨率图像。