0 次观看 • 3:06 分钟 • June 17th, 2025
在体视显微镜下，将麻醉后的转基因斑马鱼幼鱼置于含有充氧生理缓冲液的固定装置中开始实验。
大脑中的小脑含有表达荧光细胞质蛋白的基因修饰浦肯野神经元。
去除多余的培养基，然后加入熔化的琼脂糖以固定幼虫，便于稳定成像。
将幼虫背侧朝上放置，以观察小脑。
凝固后，切除多余的琼脂糖。使用玻璃针切除覆盖在脑部上方的着色皮肤，以暴露脑组织。
将琼脂糖块翻转至含有熔融琼脂糖的成像腔室中，用于倒置显微镜下的成像。
加入生理缓冲液以维持神经元功能。
将培养室置于倒置共聚焦显微镜下。施加激发光以激发荧光蛋白，从而实现标记神经元的可视化观察。
如果不去除色素性皮肤细胞，它们会散射并吸收激发光，从而降低荧光强度。
去除皮肤可改善光的穿透性，增强荧光强度，从而促进神经元的可视化。
为了包埋幼虫，使用巴氏移液管在体视显微镜下将麻醉后的幼虫转移至制样腔室中。如果仍有幼虫能够活动，则不得用于实验，直至幼虫完全无法移动为止。当幼虫完全静止后，小心移除多余的培养基，并立即在幼虫上加入至少1毫升的低熔点琼脂糖。
将斑马鱼调整为背侧朝上，尽可能靠近琼脂糖表面。如果将使用倒置显微镜对幼鱼进行成像，在琼脂糖凝固后，将包含幼鱼的琼脂糖切削成一个小的长方体块。为暴露脑部以进行成像，根据需要修剪掉脑部目标区域上方多余的琼脂糖，并使用玻璃针在目标区域附近但不覆盖其上的皮肤处做一小切口，注意不要过深刺入组织。
仅将针头轻微移动至皮肤表面下方，仔细地在目标区域周围进行微小切割，直至目标区域的皮肤可以被移除或拨开。当所有胚胎的组织均被取出后，在已预先准备好的倒置显微镜成像室中加入少量低熔点琼脂糖，然后用小刮勺将长方体形的琼脂糖块翻转180度，使其落入成像室的琼脂糖液滴上。待琼脂糖凝固后，向成像室中加入新鲜的ACSF溶液，并开始对幼体进行成像。