利用大鼠模型进行二次谐波成像以研究微管蛋白缺陷

从一片置于载玻片上并浸入缓冲液的大鼠脑组织切片开始。

大鼠患有微管蛋白病，这是一种由微管的基本组成单位——微管蛋白缺陷引起的疾病，导致微管异常积聚和功能紊乱。

这还会影响中枢神经系统中的髓鞘生成。

将切片置于带有盖玻片的双光子激发显微镜下进行详细成像。

定期为切片补充水分以保持其完整性。

将显微镜设置为非扫描成像模式，这是一种用于检测弱信号的无标记技术。

将组织暴露于脉冲红外激光下。

微管会发射出可检测的信号，称为二次谐波生成（SHG）信号。

微管异常积聚的区域会放大这些信号，从而增强其可检测性。

应用光学滤光片以优化这些信号。

所捕获的图像揭示了微管密度及异常情况，其中高强度的SHG信号和聚集现象表明微管蛋白存在缺陷以及髓鞘生成减少。

将样品置于显微镜下，通过目镜直接观察透射光，将其在物镜下调整至合适位置。去除多余的HBSS，使一层薄液膜覆盖整个样品。每隔几分钟目视检查液膜，避免液体过度蒸发和样品干燥。

为非扫描成像准备显微镜载物台，包括关闭暗培养室的所有门，或用黑色尼龙聚氨酯涂层织物覆盖培养室。沿透射路径选择非扫描成像模式，以优化对微管蛋白弱二次谐波信号的采集。

然后选择物镜。接下来，设置激光功率，并将像素驻留时间设为 12.6 微秒。采集图像的尺寸不超过 512 × 512 像素，扫描速度为 5，平均次数为 2，平均采集时间为 15 秒。首先使用 485 纳米短通滤光片采集图像；第二步，添加一个锐利的 405 纳米带通滤光片。