轴切大鼠视网膜神经节细胞中轴突再生的成像与定量分析

取一张载玻片，其上培养有永生化人源嗅鞘胶质细胞（OEG细胞）与轴突切断的大鼠视网膜神经节神经元（RGNs）的共培养体系。

OEG细胞表现出促进RGNs轴突再生的神经再生特性。

RGNs 经过免疫标记，使其胞体呈红色荧光，而轴突呈绿色荧光。

使用封片介质，将含有细胞的盖玻片进行封片。

使用落射荧光显微镜捕获RGNs的多张图像。

在成像软件中打开一幅图像。

相对于RGNs总数，定量分析具有轴突的神经元所占的百分比。

接下来，从胞体开始追踪一条轴突直至其末端，并启动轴突追踪以确定所有轴突的长度。

通过将所有轴突长度的总和除以RGNs的总数来量化轴突再生指数。

用封片剂封片，并在 4 摄氏度下保存。使用倒置荧光显微镜的 40 倍物镜定量轴突再生情况。相对于视网膜神经节细胞的总群体，定量具有轴突的神经元百分比。

使用 ImageJ 中的 NeuronJ 插件来量化轴突再生指数，或平均轴突长度，即所有已识别轴突长度的总和除以计数的神经元总数（无论其是否具有轴突）。打开图像后，点击“Analyze”并根据显微镜设置设定比例尺，以像素/微米为单位进行操作。选择“Add Tracings”以开始轴突追踪，然后从胞体开始沿轴突追踪至末端。点击“Measure Tracings”，显示追踪测量结果，然后运行分析。