为什么量化具有轴突的神经元百分比对靶点验证很重要？

量化具有轴突的视网膜神经节细胞占细胞总数的百分比，可客观评估再生效率，并通过提供可扩展的二元读数来支持通路调控的靶点验证。

将轴突长度作为独立变量进行分离，如何契合发现研究流程？

将轴突长度作为独立变量进行分离，可使研究人员将再生治疗与功能性轴突生长相关联，从而在早期发现阶段实现作用机制的去风险化和先导化合物的优化。

哪些定量因变量测量指标能够实现对轴突再生的预测性信心？

测量所有轴突长度的总和并计算轴突再生指数，可提供一个连续的定量因变量，支持对先导化合物进行剂量-反应建模及预测可信度分析。

为什么在轴突再生研究中，重复性要求对跨学科协作至关重要？

重复性要求可确保各团队在成像、示踪和定量方面的一致性，从而在发现、检测方法开发和临床前研究团队之间实现可靠的数据传递，以支持协调一致的决策。

在实施轴突再生定量分析之前，需要具备哪些统计分析能力？

实施需要具备进行组间比较、计算平均轴突长度和再生指数，以及使用标准统计工具评估变异性的能力，以支持严谨的实验设计和数据分析。

轴切大鼠视网膜神经节细胞中轴突再生的成像与定量分析

JoVE Encyclopedia of Experiments

神经科学

0 次观看 • 2:23 分钟 • June 17th, 2025

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取一张载玻片，其上培养有永生化人源嗅鞘胶质细胞（OEG细胞）与轴突切断的大鼠视网膜神经节神经元（RGNs）的共培养体系。

OEG细胞表现出促进RGNs轴突再生的神经再生特性。

RGNs 经过免疫标记，使其胞体呈红色荧光，而轴突呈绿色荧光。

使用封片介质，将含有细胞的盖玻片进行封片。

使用落射荧光显微镜捕获RGNs的多张图像。

在成像软件中打开一幅图像。

相对于RGNs总数，定量分析具有轴突的神经元所占的百分比。

接下来，从胞体开始追踪一条轴突直至其末端，并启动轴突追踪以确定所有轴突的长度。

通过将所有轴突长度的总和除以RGNs的总数来量化轴突再生指数。

用封片剂封片，并在 4 摄氏度下保存。使用倒置荧光显微镜的 40 倍物镜定量轴突再生情况。相对于视网膜神经节细胞的总群体，定量具有轴突的神经元百分比。

使用 ImageJ 中的 NeuronJ 插件来量化轴突再生指数，或平均轴突长度，即所有已识别轴突长度的总和除以计数的神经元总数（无论其是否具有轴突）。打开图像后，点击“Analyze”并根据显微镜设置设定比例尺，以像素/微米为单位进行操作。选择“Add Tracings”以开始轴突追踪，然后从胞体开始沿轴突追踪至末端。点击“Measure Tracings”，显示追踪测量结果，然后运行分析。