鸡胚中神经与血管网络的可视化

从一枚已受精的鸡胚蛋开始，该鸡胚处于早期发育阶段，且在体节1至7水平已切除神经管。

取一个来自同期转基因鸡胚的GFP标记的供体神经管，并将其植入受体中，确保正确的解剖学方向。

去除移植物周围的多余液体，以增强供体与受体组织之间的黏附性。

用透明胶带密封窗口，以防止脱水和污染。

将卵孵化至胚胎发育到所需阶段。

移除胶带。

在卵黄上找到一条将血液输送至胚胎的卵黄静脉，并去除其上方的卵黄膜。

使用玻璃针，将脂溶性荧光染料稳定地注入静脉中。

在体视荧光显微镜下观察胚胎。

注入的染料会结合血管内壁的内皮细胞，从而清晰显示血管网络，而GFP标记的神经管则可用于追踪神经网络。

准备开始移植操作时，小心地将解剖好的神经管从培养皿转移至宿主胚胎中。将神经管置于正确的方向，并轻轻推动外植体，使其紧邻切除区域。如有必要，可使用显微手术刀将外植体修剪至与切除区域完全一致的大小。

将供体和受体组织置于正确位置后，移除 PBS 及其他液体，以促进两者贴合并建立移植物。可在荧光显微镜下评估 GFP 阳性神经管成功整合至野生型鸡受体的情况。用宽 24 毫米的透明胶带密封整个窗口，以防止脱水和污染。

标记嵌合胚胎，并将卵放回培养箱中继续发育。

在预定的实验时间点，从培养箱中取出卵，并移除透明胶带以暴露胚胎。待胚胎可见后，在卵黄囊上找到一条易于接近的血管，确保血流方向朝向胚胎。

选择卵黄囊静脉上的一个分叉点作为注射位点。用镊子向相反方向撕开，去除所选注射位点上方的卵黄囊膜。接着，调节拉制的玻璃针头直径，使其与血管大小相匹配。

用5到10微升DiI溶液填充针头。迅速将针头插入静脉，然后通过口吸管稳定吹气，使DiI缓慢进入血流，避免形成凝块。可通过将胚胎短暂置于荧光显微镜下观察，以评估DiI注射是否成功。