使用落射荧光显微镜对膝状神经节神经元反应进行活体成像

从一只麻醉小鼠开始，其膝状神经节已通过手术暴露，该神经节是处理味觉的外周神经元群集。

这些神经元表达GCaMP，这是一种在结合钙离子时会发出荧光的钙离子指示剂。

清除覆盖神经节的液体，以实现清晰观察。

将小鼠置于显微镜下的吸水垫上，并利用解剖学标志定位膝状神经节。

在落射荧光显微镜上使用适当的滤光片，检测表达GCaMP的神经元中的绿色荧光。

接下来，将连接至味觉刺激物递送管的分配针插入小鼠口腔，并递送味觉刺激物。

味觉刺激物激活味觉感受细胞，释放ATP，ATP与神经节神经元受体结合，引发钙离子内流。

这些钙离子与GCaMP结合，诱导荧光发射。

将相机与显微镜的视野对齐，并同步视频记录与呈味物质递送，以通过荧光变化捕捉神经元的实时活动。

进行味觉刺激实验时，先用抽吸法吸除膝状神经节表面的液体，将小鼠置于解剖显微镜下的吸水垫上。利用鼓室留下的孔洞、颞骨上的孔洞以及第七对脑神经定位膝状神经节。使用落射荧光显微镜的FITC/GFP滤光片，检测表达GCaMP的单个膝状神经节神经元。将一种味觉刺激物导管的分配针牢固插入动物口腔内。在开始味觉刺激呈现的同时启动视频录制，并通过实时画面观察动物反应。