分析跨越 Drosophila 腹髓各层与各列的树突形态

从经过甘油透明处理的Drosophila脑组织开始，将其置于抗荧光淬灭封片剂中。

大脑包含以层状排列的延髓神经元，这些神经元负责组织突触连接，以及以柱状排列的神经元，用于协调神经回路。

其中一些神经元被绿色荧光标记物标记，与红色荧光的感光细胞轴突形成对比。

将脑组织腹侧朝上放置。在盖玻片两侧使用少量黏土固定，以防止压碎脑组织样本。

在显微镜下获取包含绿色标记神经元的水平面图像序列。

移除盖玻片，并将脑组织重新放置，腹侧朝上。

拍摄同一神经元正面的图像序列。

使用该软件合并这些图像，去除感光细胞通道，并对神经元的三维图像进行可视化。

追踪轴突，然后追踪树突，沿每一分支直至其末端，以绘制出树突在髓质层和柱中的分布结构图。

为了以水平方向安装脑组织，将经甘油透明处理的脑组织转移至载玻片中央滴加的20微升抗荧光淬灭封片剂中。然后，在盖玻片的四个角上粘附少量黏土小块，以防止盖玻片压碎脑组织。

现在，在解剖显微镜下将脑组织置于腹面朝上的位置。利用脑组织凸起的背侧表面作为解剖标志，以确定脑样本的方位。这将提供神经元的水平视野。然后贴上盖玻片。

使用共聚焦显微镜进行观察，理想情况下应配备 GaAsP 检测器。采用高数值孔径物镜和 2.5 倍数字放大倍率获取水平视图的图像序列。至少采集 180 个光学切片，图像分辨率为 512×512 像素，步进间距为 0.2 微米。

获取第一组图像堆栈后，从载玻片上取下盖玻片，并将脑组织重新放置为前部朝上的位置，以获得额面视角。然后，使用相同的技术，对在水平视角中成像的同一神经元进行额面视角的新图像堆栈采集。务必同时记录目标神经元相对于中脑神经毡的位置。

在较低放大倍数下，识别相同的神经元是可行的。然而，如果由于组织较深而导致信号丢失，则仅需对脑的腹侧半部分进行成像。

本实验步骤的目标是追踪神经突并为配准分配参考点。首先，打开重组后的图像文件。然后进入“编辑”菜单，选择“显示调整”，并关闭红色的感光细胞通道。

接下来，在超越模式下可视化图像。如果计算机配备了立体成像系统，请开启立体显示，并使用四缓冲模式来可视化三维图像。添加新的丝状结构。进入超越模式中的“丝状结构”选项，然后点击标有“跳过自动创建，手动编辑”的选项卡。接着点击“绘制”选项卡并选择自动深度（AutoDepth）。

接下来，选择“设置”。打开“线条”选项，并输入适当的像素数值以获得更好的可视化效果。然后依次打开“显示树突”、“起始点”和“分支点”，并将渲染质量设置为 100%。现在选择“绘制”选项卡，开始追踪神经突。首先从轴突开始，然后转向树突。转化膜神经元的轴突与树突应较容易区分。

完成神经突的追踪后，返回“设置”并取消勾选“起始点”和“分支点”。然后进入“Surpass”，选择“导出”，选中目标对象，并将该纤维保存为 Inventor 文件。