可视化培养的星形胶质细胞中货物的细胞内转运

首先在培养皿内的盖玻片上对小鼠原代星形胶质细胞进行贴壁培养。

与穿过完整细胞膜进入星形胶质细胞的荧光嗜酸探针一起孵育。

探针选择性地积聚在酸性内溶酶体囊泡内，并荧光标记囊泡以监测其运输。

洗涤以去除多余的探针并加入新鲜培养基。

将培养物置于共聚焦显微镜下，聚焦于单个细胞以进行延时成像。

标记的货物可视化为分布在核周区域、

细胞质和星形胶质细胞过程中

Z 轴捕获多个焦平面，以可视化整个三维细胞体积中的货物。

以规定的时间间隔进行成像，以跟踪星形胶质细胞内不同深度的细胞内货物运输。

分析货物运动，以区分静止货物、向细胞外围移动的货物和向细胞核移动的货物。

成像前30分钟，在200微升星形胶质细胞培养基中将合适的溶酶体标记探针稀释至1微摩尔的工作浓度，并在37摄氏度下用探针标记星形胶质细胞30分钟。然后用温热的星形胶质细胞培养基洗涤细胞一次，并用成像培养基代替洗涤液。

探针标记后，立即将星形胶质细胞培养容器放入显微镜载物台上的相应适配器中。并使用落射荧光，定位表达荧光蛋白或探针的细胞。使用数码相机调整荧光样品照明以可视化所选细胞，并调整焦点并放大到单个细胞中。

然后使用缩放和确定对焦功能以每两秒一帧的频率获取单个 C 堆栈延时系列，时间间隔在 300 到 500 秒之间。将延时图像保存并导出为 Avi 或 TIFF 堆栈文件。