可视化培养星形胶质细胞中货物的细胞内运输

从培养皿中盖玻片上贴壁生长的小鼠原代星形胶质细胞开始。

使用一种可穿透完整细胞膜并进入星形胶质细胞的荧光酸性探针进行孵育。

该探针可选择性地在酸性内溶酶体囊泡内聚集，并通过荧光标记囊泡以监测其转运过程。

洗涤以去除过量的探针，并加入新鲜培养基。

将培养物置于共聚焦显微镜下，聚焦于单个细胞以进行延时成像。

将标记的货物可视化为分布在核周区域的荧光斑点，

细胞质和星形胶质细胞突起。

沿Z轴捕获多个焦平面，以在三维细胞体积中可视化货物。

以特定时间间隔进行成像，以追踪星形胶质细胞内不同深度的细胞内货物运输。

分析货物运输，以区分静止的货物、向细胞周边移动的货物以及向细胞核移动的货物。

成像前30分钟，将合适的溶酶体标记探针用200微升星形胶质细胞培养基稀释至1微摩尔的工作浓度，在37摄氏度下标记星形胶质细胞30分钟。随后用预温的星形胶质细胞培养基洗涤细胞一次，并更换为成像培养基。

探针标记后立即把星形胶质细胞培养容器放入显微镜载物台上相应的适配器中。使用落射荧光光源，找到表达荧光蛋白或探针的细胞。利用数字相机调节荧光样品的照明以观察所选细胞，并调节焦距，放大至单个细胞。

然后使用缩放和精确对焦功能，以每2秒一帧的频率采集单个C-stack时间序列，时间间隔范围为300至500秒。将时间序列图像保存并导出为Avi或TIFF堆栈文件。