小鼠脑切片中血脑屏障的高分辨率三维共聚焦成像

0 次观看3:04 分钟 • June 18th, 2025

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首先使用共聚焦显微镜软件,并设置图像采集参数。

然后,取一块固定在玻璃载片上的小鼠脑组织切片。该切片使用针对血脑屏障组分的抗体进行染色。

血脑屏障是血液与大脑之间的一种选择性细胞界面,用于维持内环境稳定。

在盖玻片上滴加一滴具有所需折射率的浸油,以优化分辨率并最大限度减少光的折射。

将玻片置于显微镜载物台上,使用落射荧光灯观察样本。

使用适当的滤光片,定位经 DAPI 染色的细胞核,并确定用于成像的毛细血管段。

启动实时扫描,并调整每个荧光通道的参数以获取高质量图像。

最后,定义Z-stack采集的起始点和终止点,以生成血脑屏障的三维图像。

在控制显微镜的软件采集菜单中设置图像采集参数。在图像尺寸的下拉菜单中,选择 1,024 × 1,024 像素的数值。通过调整缩放菜单的数值,将像素大小修改为 200 至 300 纳米之间的值。

在采集速度下拉菜单中,选择 400 赫兹的数值。接着,在系统设置菜单中选择像素深度,并将数值更改为 12 位。然后,在显微镜软件的采集选项卡中,启用逐帧顺序采集选项。通过调整针孔菜单中的数值,将每个通道的光学切片厚度设置为 0.75 至 1 微米之间的值。

在盖玻片上滴加一滴折射率为1.52的浸油,覆盖脑组织切片,以匹配玻璃盖玻片和物镜的折射率。随后将样品置于显微镜下,打开落射荧光灯,通过显微镜双目镜观察样品。接着按下按钮启动实时扫描模式。扫描过程中,调节各通道的增益和激光强度,以最大化图像的动态范围并避免像素饱和。之后设定光学Z轴堆栈的起始和终止层面,使其覆盖毛细血管的整个体积,并采用0.45微米的步长。

重要的是,在成像过程中所有采集参数应保持一致。

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最后更新:15 八月 2026