Name: 成像白细胞粘附到血管内皮细胞在高腔内压力 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-23T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 20 s
Description: 了解在高压条件下白细胞粘附血管内皮细胞的实时成像技术。该方法使用大鼠或小鼠颈动脉，在体外加压灌注系统中模拟高血压病理状态，为研究血管炎症和动脉粥样硬化机制提供重要工具。

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本研究部分得到了维多利亚州政府OIS计划、澳大利亚国家健康与医学研究理事会的项目和课题资助（JPF Chin-Dusting）以及研究生奖学金（D Michell）的支持。

1. 分离颈动脉
<ol>
	<li>通过 CO2/O2 窒息法处死 10 周龄的 Sprague Dawley 大鼠。</li>
	<li>完整剥离左右两侧颈总动脉，并连同主动脉和心脏一起取出，确保血管受到的牵拉最小。</li>
	<li>在冰冻的 Krebs 缓冲液中将颈总动脉与主动脉和心脏分离，并进行精细解剖。</li>
	<li>将分离后的血管置于冰上的 Krebs 溶液中保存，待安装前使用。</li>
</ol>
大约需要时间 = 45 分钟
2. 启动反应室
<ol>
	<li>在血管腔的近端和远端连接处，使用经碳酰气（95% O2；5% CO2）通气维持生理 pH 的 Krebs 缓冲液，在 37°C 条件下进行冲洗。</li>
	<li>确保导管和套管完全冲洗干净并正确对齐。</li>
	<li>用 Krebs 缓冲液冲洗 P1（近端）和 P2（远端）压力传感器，关闭活塞以确保传感器内无气泡。</li>
	<li>将传感器连接至相应的连接口，再次冲洗 Krebs 缓冲液以确保无气泡，然后关闭通向腔室的活塞。</li>
</ol>
大约需要时间 = 15 分钟
3. 加压容器室
<ol>
	<li>开启压力设备：压力伺服器、压力监测器、蠕动泵（图1）。</li>
	<li>启动蠕动泵并施加压力，将压力伺服器设为自动运行模式，以20 mmHg（调节至1档）的压力使Krebs缓冲液流经管路，确保无气泡残留。</li>
	<li>将管路连接至封闭的P2传感器。压力将逐渐稳定。</li>
	<li>打开P2通向血管腔室的阀门，以排出可能存在的气泡，随后关闭阀门。</li>
	<li>向浴槽中加入Krebs缓冲液（5 - 7 mL）。</li>
</ol>
大约需要时间 = 10 分钟
4. 安装血管
<ol>
	<li>在解剖显微镜下，将黑色聚酯线绑在每根套管上（图2）。</li>
	<li>将套管和套管支架分开，并将¼血管段（主动脉弓端）安装到P1套管上。注意不要撕裂血管。</li>
	<li>使用装有Krebs缓冲液的注射器，通过P1传感器轻轻冲洗血管内多余的血液。然后关闭P1与腔室之间的通路。</li>
	<li>用聚酯线将血管固定在P1套管上。</li>
	<li>将套管/套管支架靠近，以便安装到P2套管上。</li>
	<li>将血管远端约¼长度的部分安装到远端套管上，并用聚酯线固定。</li>
</ol>
大约需要 20 分钟
5. 加压容器
<ol>
	<li>调整套管夹，确保血管无弯曲或拉伸。</li>
	<li>关闭P1和P2与腔室的连接，将压力伺服系统从自动模式切换至手动模式。观察压力伺服系统，确认10秒内压力无持续下降。若压力持续下降，则表明存在泄漏，需检查并紧固连接处和传感器。</li>
	<li>将压力伺服系统调回自动模式，然后打开P2与腔室的连接。在显微镜下观察，当旋塞打开至腔室时血管是否扩张。</li>
	<li>将压力伺服系统切换至手动模式，再次检查10秒内压力是否持续下降。若存在泄漏，则系统未达到压力密封状态，血管可能存在破损。</li>
	<li>切换回自动模式，打开P1与腔室的连接。在手动模式下检查压力是否保持稳定。</li>
	<li>若无泄漏，在手动模式下将旋钮调至2（40 mmHg）。</li>
	<li>调回自动模式，在显微镜下观察血管状态。必要时调整套管夹，确保血管无弯曲。在手动模式下检查是否存在泄漏。</li>
	<li>重复步骤5.6至5.7，依次将旋钮调至3（60 mmHg）、4（80 mmHg）等，直至达到所需压力。</li>
</ol>
大约需要时间 = 15 - 30 分钟
6. 培养加压容器
<ol>
	<li>连接温度控制器，并设置为 37°C。</li>
	<li>使用第二台蠕动泵以 1 mL/min 的流速将 Krebs 缓冲液灌注到血管腔浴槽中。</li>
	<li>将吸引器连接至浴槽，确保仅移除浴液的上层液体。</li>
	<li>将加压的血管在 37°C 条件下孵育 1 小时，压力设置为自动模式。</li>
	<li>定期检查压力是否泄漏（是否切换至手动模式）。</li>
	<li>在孵育过程中，通过直接将药物加入浴液中，即可观察不同药理学干预的作用效果。</li>
</ol>
大约需要时间 = 1 小时
7. 用全血灌注加压血管
<ol>
	<li>孵育期间，采集至少 7.5 mL 人全血/血管，每毫升血液中加入 40 U 肝素抗凝。将血液置于 50 ml 离心管中，37°C 孵育。</li>
	<li>孵育结束前 10 分钟，在避光条件下，用 VybrantDil（1:1000）标记血液，37°C 孵育 10 分钟。</li>
	<li>10 分钟后，将血液吸入注射器中，排除所有气泡，并连接至设定为 37°C 的带加热套的注射泵。</li>
	<li>关闭 P1 传感器与灌注室/血管的连接，连接注射器和废液管路。</li>
	<li>以 1000 μL/min 的流速通过废液管路灌注血液，以去除任何气泡。</li>
	<li>打开 P1 与灌注室的连接。压力伺服系统将自动调节以维持设定压力。</li>
	<li>以 100 μL/min 的流速进行血液灌注。</li>
	<li>使用配备数字相机的荧光显微镜，在灌注后 1、3、5、7.5 和 10 分钟时，分别记录灌注血管的两个视野，每个视野持续 15 秒。</li>
	<li>灌注结束后，可通过药理学技术（如肌动图）评估内皮完整性和功能，并通过免疫组织化学检测黏附分子表达，以进一步验证炎症反应。</li>
</ol>
大约需要时间 = 15 分钟
8. 代表性结果：
压力室装置的示意图见图1。将数码相机与荧光显微镜耦合后，可通过实时视频记录立即观察结果。代表性视频图像见图3，其中若白细胞静止停留达10秒，则视为已黏附于内皮。通过连续循环播放视频记录，可对黏附细胞进行计数，并以每视野平均数表示。尽管低压（图3A）和高压（图3B）均会引起一定程度的黏附，但在较高管腔压力下白细胞黏附显著增加，该结果亦通过定量分析得以证实（图4）。
<img alt="灌流示意图，插管血管装置连接传感器、压力监测仪和温度控制系统。" src="/files/ftp_upload/3221/3221fig1.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图1"> 
图1. 加压 离体 血管腔示意图 连接近端（P1）传感器和远端（P2）传感器的套管化血管，可实现血管内血压的调控。灌注通过P1传感器进行，血压通过P2传感器维持。
<img alt="用于流体动力学研究的微流控装置示意图；可见通道和电极。" src="/files/ftp_upload/3221/3221fig2.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图 2"> 
图 2. 带缝合线的套管。 每个套管上均连接有黑色聚酯缝合线。
<img alt="流体中颗粒分布的显微分析；荧光显微镜图像显示空间变异。" src="/files/ftp_upload/3221/3221fig3.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Figure 3"> 
图3. 代表性视频图像。 灌注10分钟后，在80 mmHg（A）和120 mmHg（B）压力下荧光观察到的动态细胞黏附（红色箭头）。
<img alt="白细胞黏附图；细胞数/视野 vs. 时间；比较 80 与 120 mmHg 压力的影响。" src="/files/ftp_upload/3221/3221fig4.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图 4"> 
图 4. 在低（80 mmHg）和高压力（120 mmHg）下孵育 1 小时后，Sprague Dawley 大鼠颈动脉中的白细胞黏附情况。***P&lt;0.001，经双因素重复测量方差分析（ANOVA）结合 Bonferroni 事后检验分析得出。

<ol><li>Lopez, A. D., Mathers, C. D., Ezzati, M., Jamison, D. T., Murray, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+and+regional+burden+of+disease+and+risk+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global and regional burden of disease and risk factors.</a> Lancet. 367, 1747-1757 (2001).</li>
<li>Szczech, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+kidney+injury+and+cardiovascular+outcomes+in+acute+severe+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Acute kidney injury and cardiovascular outcomes in acute severe hypertension.</a> Circulation. 121, 2183-2191 Forthcoming.</li>
<li>Rodriguez-Garcia, J. L., Botia, E., de La Sierra, A., Villanueva, M. A., Gonzalez-Spinola, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significance+of+elevated+blood+pressure+and+its+management+on+the+short-term+outcome+of+patients+with+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hypertens%22%5BJournal%5D)">Significance of elevated blood pressure and its management on the short-term outcome of patients with acute ischemic stroke.</a> Am J Hypertens. 18, 379-384 (2005).</li>
<li>Levy, D., Larson, M. G., Vasan, R. S., Kannel, W. B., Ho, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+progression+from+hypertension+to+congestive+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">The progression from hypertension to congestive heart failure.</a> JAMA. 275, 1557-1562 (1996).</li>
<li>Ley, K., Laudanna, C., Cybulsky, M. I., Nourshargh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Getting+to+the+site+of+inflammation%3A+the+leukocyte+adhesion+cascade+updated%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Getting to the site of inflammation: the leukocyte adhesion cascade updated.</a> Nat Rev Immunol. 7, 678-689 (2007).</li>
<li>Riou, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+pressure+promotes+monocyte+adhesion+to+the+vascular+wall%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">High pressure promotes monocyte adhesion to the vascular wall.</a> Circ Res. 100, 1226-1233 (2007).</li>
<li>Ley, K., Gaehtgens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial%2C+not+hemodynamic%2C+differences+are+responsible+for+preferential+leukocyte+rolling+in+rat+mesenteric+venules.+Circ+Res%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Endothelial, not hemodynamic, differences are responsible for preferential leukocyte rolling in rat mesenteric venules. Circ Res.</a> 69, 1034-1041 (1991).</li>
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<li>Woollard, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiological+levels+of+soluble+P-selectin+mediate+adhesion+of+leukocytes+to+the+endothelium+through+Mac-1+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Pathophysiological levels of soluble P-selectin mediate adhesion of leukocytes to the endothelium through Mac-1 activation.</a> Circ Res. 103, 1128-1138 (2008).</li>
<li>Eberth, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+pulsatility+in+hypertensive+carotid+artery+growth+and+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hypertens%22%5BJournal%5D)">Importance of pulsatility in hypertensive carotid artery growth and remodeling.</a> J Hypertens. 27, 2010-2021 (2009).</li>
<li>Cooke, J. P., Rossitch, E., Andon, N. A., Loscalzo, J., Dzau, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+activates+an+endothelial+potassium+channel+to+release+an+endogenous+nitrovasodilator%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Flow activates an endothelial potassium channel to release an endogenous nitrovasodilator.</a> J Clin Invest. 88, 1663-1671 (1991).</li>
</ol>

该研究方案已获阿尔弗雷德医学研究与教育园区动物伦理委员会和阿尔弗雷德医院伦理委员会批准。

这是一种改进的方法，用于在加压条件下实时研究白细胞在完整离体血管中与内皮细胞的黏附。仅灌注血管腔即可快速验证大型小鼠和大鼠血管的促炎性表型。通过调控压力，可观察从低到极高的管腔压力下的动态细胞相互作用，从而更真实地模拟生理和病理生理条件。此外，使用适当的细胞成像程序还可测量血管直径，进而确定并调控剪切流和流速。
凭借其肌动图功能，将药物干预物质加入浴液可为该模型的实验条件增加另一个维度，从而实现对机械和信号通路的研究。尽管在压力调控过程中无法确认内皮是否完整保留，但可在灌注后进行乙酰胆碱（ACh）和去氧肾上腺素（PE）的反应检测9。
需要注意的是，该实验装置用于演示管腔内压力对细胞间相互作用的影响，而非脉动血流或收缩压、舒张压的作用。此外，尽管实验中观察到了急性压力变化对白细胞黏附的影响，但该装置也可用于研究慢性压力效应（例如延长孵育时间，或使用慢性压力动物模型）。本实验以Sprague Dawley大鼠的颈总动脉为例进行演示，但通过适当调整套管尺寸，也可使用其他品系或物种的血管。需要特别指出的是，动物的年龄和体重会影响血管尺寸，因此该实验装置需根据每根血管的具体情况进行个体化调整。仔细而谨慎地剥离结缔组织可极大改善白细胞的观察效果。

<table><tbody><tr><td>显微镜 </td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td>SteREO Discovery V.20</td><td></td></tr><tr><td>PHD 2000 注射泵</td><td>Harvard Apparatus</td><td>70-2016</td><td></td></tr><tr><td>数字相机及控制器</td><td>Hamamatsu Corp.</td><td>C4742-95</td><td></td></tr><tr><td>荧光照明系统</td><td>Lumen Dynamics</td><td>X-Cite 120</td><td></td></tr><tr><td>血管腔室</td><td>Living Systems Instrumentation</td><td>CH/1/SH</td><td></td></tr><tr><td>压力伺服控制器及蠕动泵</td><td>Living Systems Instrumentation</td><td>PS - 200</td><td></td></tr><tr><td>灌注压力监测仪</td><td>Living Systems Instrumentation</td><td>PM - 4</td><td></td></tr><tr><td>2 个压力传感器</td><td>Living Systems Instrumentation</td><td>PT - F</td><td></td></tr><tr><td>温度控制器</td><td>Living Systems Instrumentation</td><td>TC-01</td><td></td></tr><tr><td>蠕动泵</td><td>Instech Laboratories, Inc</td><td>P720</td><td></td></tr><tr><td>VybrantDil 细胞标记溶液</td><td>Invitrogen</td><td>V-22885</td><td>使用比例 1:1000</td></tr></tbody></table>

在高管腔压力下成像白细胞与血管内皮的黏附

Imaging Leukocyte Adhesion to the Vascular Endothelium at High Intraluminal Pressure

全球范围内，高血压的发病率约为人口总数的四分之一，是全球最主要的生物医学死亡风险因素。在血管系统中，高血压与内皮功能障碍和炎症反应增强相关，可导致动脉粥样硬化以及多种疾病状态，如慢性肾病。2, 脑卒中3 和心力衰竭4动脉粥样硬化发生过程中血管炎症的初始步骤是白细胞黏附级联反应，包括白细胞在内皮细胞表面的滚动、锚定、黏附以及随后的跨内皮迁移。白细胞向内皮的募集与积聚由多种黏附分子的上调所介导，这些分子包括血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和E-选择素，同时还伴随细胞因子和趋化因子释放的增加以及活性氧物质的上调。5. 体外 静态黏附实验等方法有助于确定细胞间黏附的相关机制以及细胞黏附分子的分析。先前研究中采用的方法 体外 研究表明，内皮细胞所受压力的急性升高可导致单核细胞黏附，以及黏附分子和炎症标志物的上调6 然而，与许多 体外 这些发现尚未在生理流动条件下使用全血进行实时检测。因此， 体内 在动物模型中，检测血管炎症和斑块形成的方法正日益得到广泛应用。活体显微镜技术现已被广泛用于评估白细胞的黏附、滚动、迁移及跨内皮迁移。7-9在综合压力对白细胞与内皮细胞黏附作用的影响时 体内 相关研究较为有限。其中一项研究探讨了血流和剪切力对动脉生长和重塑的实时影响，但炎症标志物仅通过免疫组织化学方法进行评估。10在此，我们介绍一种利用全血灌注在完整加压血管中实时记录白细胞黏附的模型。该方法是对原有方法的一种改进。 离体 血管腔灌注模型9 可实现完整血管中白细胞与内皮细胞黏附相互作用的实时分析。我们的改进使得管腔内压力可调节至高达200 mmHg，从而不仅可在生理流动条件下进行研究，还可研究压力条件下的血管反应。尽管已有研究利用压力肌动图系统观察血管壁和管腔直径的变化11 以及血管收缩，这是首次实时展示白细胞与内皮细胞相互作用的技术。本文以大鼠颈动脉为例，将其取出后连接至定制的流动腔室，并与荧光显微镜耦合，演示该技术的操作过程。该血管腔室底部配有大面积盖玻片，可使用大直径、短工作距离的物镜对血管进行成像。此外，可通过选择性使用激动剂和/或拮抗剂，进一步研究调控细胞黏附的分子机制。与活体显微技术相比，该方法的优势在于无需侵入性手术，因而通量更高；同时，该方法允许对目标血管进行局部抑制剂处理，而活体显微仅能实现全身性抑制剂干预。

这是一种用于观察白细胞在离体加压血管中与内皮细胞黏附的方法。该技术能够在不同管腔压力（最高达200 mmHg）的剪切流条件下研究血管黏附过程，从而模拟高血压的病理生理状态。

全球范围内，高血压的发病率约为人口总数的四分之一，是全球最主要的生物医学死亡风险因素。

本实验的总体目标是观察白细胞在离体加压血管中对内皮细胞的黏附。首先从大鼠或小鼠中分离颈动脉，然后将血管安装到加压腔室中以实现该目标。随后将血管加压，并在设定的压力下孵育一小时。最后，将标记的全血灌注通过加压的血管。最终，可通过定制的离体血管腔室，结合显微操纵仪和荧光显微镜，获得显示白细胞与内皮细胞实时黏附的结果。因此，与现有的静态黏附实验等方法相比，该技术的主要优势在于，可以在使用全血的情况下，于完整且具有功能的动脉中观察白细胞的黏附过程。该方法有助于回答高血压研究中的关键问题，例如高管腔压力对炎症的影响，以及其如何促进动脉粥样硬化的发展。在分离10周龄散养多利大鼠的颈动脉、并对灌流腔室进行预处理和加压后，需在解剖显微镜下将血管进行安装：首先将黑色聚酯线绑在每个套管上，然后将血管移至浴槽中，再将血管的一端安装到P1套管上。使用装有克雷布斯缓冲液的注射器时，注意不要撕裂血管。通过P1换能器轻轻冲洗血管中多余的血液。关闭P1与腔室的连接。使用聚酯线将血管固定在 P1 插管上。移动插管和插管支架，使其靠近以便安装到 P2 插管上。将血管远端的四分之一部分安装到 P2 插管上。使用聚酯扎带固定，开始对血管施加压力。调整套管支架，确保在P1和P2关闭至腔室的情况下，血管无弯曲或拉伸。将压力伺服系统从自动模式切换为手动模式。检查压力伺服器，确认10秒内压力无下降。若压力降低，表明存在泄漏，需确保连接处和换能器固定到位，以保证密封性。将压力伺服器调回自动模式，然后打开通向显微镜下腔室的P2，观察血管扩张情况。当阀门打开通向腔室时，将压力伺服切换至手动模式。再次检查压力是否有下降。如果压力持续下降，则说明系统不密封，反应容器中可能存在漏气孔。切换回自动模式，打开通向腔室的 P1 阀门。在手动模式下，检查压力是否保持稳定。若压力稳定，将旋钮调至2，使血管内压力升至40毫米汞柱。切换至自动模式，在显微镜下观察血管。如有必要，在手动模式下调节套管夹，确保血管无弯曲。检查有无泄漏。然后逐步增加旋钮设定值，期间将开关切换至自动模式，同时在显微镜下观察血管，直至达到目标压力。达到目标压力后，将灌流室转移至体视显微镜下。将温度控制器设置为 37 摄氏度并连接。然后连接蠕动泵和吸引器，以保持浴槽中克雷布斯缓冲液的新鲜。将加压血管在 37 摄氏度下孵育一小时。定期检查是否存在泄漏。在避光条件下，用荧光染料标记7.5毫升预先收集的全血。然后在37摄氏度下孵育10分钟。用注射器采集血液，排除所有气泡，并将注射器连接至设定为37摄氏度的加热套注射泵上。关闭通向腔室的P1传感器，连接注射器和废液管。以每分钟1000微升的速度通过废液管排出血液，以去除任何气泡，然后打开P1通向腔室。压力伺服系统将自动调节以维持所需压力，使用荧光显微镜耦合数字相机，在多个时间点以每分钟100微升的速度灌注血液，并对灌注血管的两个视野各记录15秒。此处显示的是白细胞的代表性图像，若白细胞在内皮上静止不动达10秒，则被视为已黏附。通过连续循环的视频记录，可计算每个视野中细胞的平均数量，而低压和高压均会导致一定程度的黏附。在较高的管腔压力下，白细胞粘附显著增加。该图通过定量方式展示了这一现象，显示在120毫米汞柱压力下，每视野粘附的细胞数量多于80毫米汞柱压力下的情况。在完成该操作后，可进一步采用其他方法，如PCR和免疫组织化学，以回答有关黏附分子基因和蛋白表达的更多问题。

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Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

成像白细胞粘附到血管内皮细胞在高腔内压力

本文介绍了一种无创的双光子（2P）显微成像方法，用于研究小鼠足垫中的白细胞归巢过程。我们讨论了组织成像制备过程中的技术细节，并指导读者完成从初始设置到实验实施及数据采集的典型实验流程。...

白细胞归巢与迁移的非侵入性成像 体内

我们描述了一种用于在中性粒细胞趋化因子刺激下，中性粒细胞募集过程中动态测量中性粒细胞与内皮细胞相互作用的明场活体显微镜技术方案。...

通过活体视频显微镜追踪中性粒细胞在组织内的管腔内爬行、跨内皮迁移及趋化运动

本视频展示了一种基于层流的检测方法，用于表征白细胞与其细胞伙伴（如内皮细胞）之间的相互作用。该方法可在白细胞流经完整且融合的血管细胞层时，动态观察其黏附、去黏附及跨内皮迁移过程。...

一种基于层流的白细胞与内皮细胞相互作用研究方法

白细胞向肝脏的募集发生在由独特的肝窦内皮细胞衬覆的肝窦特殊通道中。在生理剪切应力条件下，通过相差显微镜观察白细胞跨越人肝窦内皮的过程，有助于阐明该过程背后的分子机制。...

一种在剪切应力条件下研究白细胞向人肝窦内皮黏附的流动黏附实验

白细胞通过细胞旁路或跨细胞途径穿过内皮单层。我们建立了一种简单的方法，用于在生理流动条件下追踪内源性连接蛋白VE-cadherin和PECAM-1在白细胞跨内皮迁移过程中的分布，以区分这两种迁移途径。...

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此处，我们介绍一种可用于评估白细胞募集动态的实验方案 离体...

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这种简化的小鼠肠系膜静脉活体显微成像方法可用于多种炎症模型，以观察白细胞-内皮细胞以及血小板-白细胞之间的相互作用。...

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可视化血管紧张素II输注小鼠中白细胞滚动与黏附：技术与注意事项

血管壁损伤或炎症期间，白细胞会积极地与血管细胞和血小板相互作用。本文介绍一种基于层流的简便检测方法，用于表征白细胞与其细胞伙伴之间相互作用的分子机制。...

基于层流的检测方法用于研究白细胞在培养的血管细胞和黏附血小板上的募集作用

本逐步实验方案详细描述了用于评估hiPSC-ECs中炎症反应以及在生理流动条件下分析白细胞黏附的实验设置和数据分析方法。...

用于评估白细胞黏附至人诱导多能干细胞来源的内皮细胞（hiPSC-ECs）的微流控检测方法

在本方案中，采用了一种仿生微流控检测方法，该方法能够重现生理相关的微血管环境，并完整再现白细胞黏附/迁移级联过程，用于研究炎症疾病中的白细胞-内皮细胞相互作用。...

一种用于研究炎症过程中白细胞与内皮细胞相互作用的微生理系统

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在高管腔压力下成像白细胞与血管内皮的黏附

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