利用荧光大体显微镜在小鼠脑内进行脑脊液运输的活体成像

从一只已麻醉且颅骨经手术暴露并置于荧光宏观显微镜下的小鼠开始。

使用覆盖在颅骨上的头板固定头部，以创建颅窗。

将含有荧光示踪剂的导管插入脑的枕大池，即CM。

脑池作为脑脊液（CSF）的储库，脑脊液在围绕大脑的蛛网膜下腔中循环。

使用可见光，聚焦于颅骨。

将荧光示踪剂注入CM，然后切换至荧光成像。

使用特定波长的光照射以激发示踪剂。

示踪剂吸收这种光并发出荧光信号。

荧光示踪剂随脑脊液流动，从而可以观察脑脊液通过蛛网膜下腔进入围绕脑动脉的血管周围间隙并渗透的过程

小动脉，进入脑组织。

随时间捕获荧光信号以可视化脑脊液流动。

将连接套管的小鼠和输注泵小心地放置在运输车上，运送到体视显微镜处，并将头部固定器置于体视显微镜的载物台上。确保从注射泵到小脑延髓池套管的管路不过于紧绷，且无扭曲或弯折。观察小鼠呼吸频率及黏膜是否呈粉红色，以确认氧合状态良好。

打开显微镜相机和发光二极管，并启动实时成像模式。调整成像视野的放大倍数，使视野顶部的鼻额缝和底部的人字缝能够清晰可见。固定到位后，用胶带将头部固定器固定在体视显微镜载物台上，并聚焦体视显微镜至暴露的颅骨，直至焦平面位于冠状缝后方的顶骨两侧。

进行脑脊液示踪剂灌注时，将灌注泵设置为适当的流速和体积，并为每个通道的示踪剂设置合适的激发波长和曝光时间。然后在同时启动示踪剂灌注和成像之前，检查宏观成像系统的触发功能是否正确。