利用延时扫描共聚焦显微镜成像胶质母细胞瘤组织中的肿瘤细胞迁移

从手术切除的肿瘤中获取胶质母细胞瘤组织切片开始。

将组织切片维持在培养基中以支持细胞存活。

切片中的肿瘤细胞表达一种绿色荧光蛋白（GFP），这有助于在细胞迁移过程中观察肿瘤细胞。

将含有组织切片的培养皿放置在共聚焦显微镜的载物台上。

放置一个载物台培养箱，以维持培养基的温度。

选择一个物镜，在显微镜下观察切片培养物。

显微镜利用激光激发细胞中的荧光蛋白。

现在，逐层扫描样品，以在不同深度处获取图像。

叠加图像以创建细胞的详细三维图。

然后，以固定时间间隔采集Z轴层扫图像，以追踪细胞的移动和方向，从而实现对肿瘤细胞随时间迁移行为的研究。

将培养皿放入共聚焦显微镜的密封式显微镜载物台培养箱中，设置温度为37摄氏度，含5% CO₂。使用长工作距离的10倍空气物镜，结合单光子或多光子成像技术，获取细胞迁移的三维、时间分辨图像。通过显微镜观察组织切片，寻找切片边缘与组织中心之间荧光标记肿瘤细胞密度适中的合适视野。然后在成像软件的多维分析模式下，设置z轴堆栈的中心位置，确保所有待成像位置均包含可见的荧光细胞信号，并为每次z轴堆栈采集设置合适的时间间隔。