星形胶质细胞中室特异性动力学的自发钙成像

0 次观看2:33 分钟 • June 17th, 2025

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在记录室中取含有神经元-星形胶质细胞混合培养物的聚合物涂层盖玻片。

这些转染的细胞在浆膜和内质网膜上表达钙敏感蛋白,在钙结合时发出荧光以跟踪亚细胞钙动力学。

加入含有钙离子的培养基并盖上腔室以防止蒸发。

将腔室置于荧光显微镜下。

钙离子与钙敏感蛋白质结合。蓝光照射后,内质网外膜上的钙敏感蛋白发出绿色荧光。使用这种绿色荧光来定位星形胶质细胞。

接下来,用绿光照射。质膜上的钙敏感蛋白发出红色荧光。确认在同一星形胶质细胞中存在红色荧光,表现出绿色荧光。

记录质膜上钙敏感蛋白的延时图像,然后记录内质网外膜上的钙敏感蛋白。

分析图像以观察所选星形胶质细胞中室特异性自发钙活性。

含有用 Lck-RCaMP2 和 OER-GCaMP6f 转染的细胞的盖玻片安装到显微镜的记录室中。加入 400 微升成像介质,并在腔室顶部盖上盖子。选择 GCaMP6f 的滤镜集和光源。找到表达OER-GCaMP6f的星形胶质细胞。

接下来,为 RCaMP2 选择滤光片集和光源。并确认Lck-RCaMP2是否在同一星形胶质细胞中表达。记录Lck-RCaMP2在2赫兹的延时图像两分钟,并保存成像数据。

在此之后,将过滤器集更改回 GCaMP6f 的过滤器集。在 2 赫兹下记录 OER-GCaMP6f 的延时图像两分钟。然后保存成像数据。

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最后更新:1 八月 2026