一个生产缺血性损伤模型的简化技术

以下实验的总体目标是使缺血性伤口成为可能，不仅在正常兔子中，而且在抵抗力降低的兔子（例如老年人或糖尿病兔子）中。目前用于缺血伤口制造的所有技术都是高度侵入性的，到目前为止，这些技术都不能用于糖尿病动物。该手术使用微创手术，首先在三个血管束上做三个小皮肤切口。

下一步是隔离和保护中央静脉和小血管束，使流向耳朵的血液循环减少但不会完全消除。最后，剩余的血管、神经和皮下组织都通过皮肤切口被切断或结扎。耳缺血可通过无动脉搏动、耳外观、温差和皮下血氧饱和度来证实。

这种微创手术可能看起来很难进行，但实际上很容易。这种技术的主要优点是它对皮肤的破坏非常小。自从我们在 2007 年首次发布这项技术以来，我们收到了许多问题。

此后，我们进一步简化了此程序。为了在不使用显微镜的情况下更容易完成，首先称量选定的兔子，使用氯胺酮和甲苯噻嗪的混合物麻醉兔子。监测兔子的生命体征，可以在背侧识别出供应耳朵的三个血管束。

这些是中央束，这是最大的束，其抵押品与其他船只相连。动脉通常非常小或不存在的 coddle 束，以及颅束。在腹侧，远端皮肤不接受来自近端血管的血液供应。

相反，耳背侧的血管束有许多穿过软骨的穿透分支，为远端腹侧皮肤提供血液供应。在一些兔子中，腹侧也有一个非常小的皮下血管，它为不超过三分之一的腹侧皮肤供血。在开放的圆周皮肤切口中，腹侧切口基本上没有出血。

在继续之前，确保兔子对疼痛刺激没有反应，使用脚趾捏和眼反射，通过涂抹人工泪液来保护动物的眼睛。软膏。手术过程中用加热垫让兔子保持温暖。然后使用 Betadine 和酒精擦洗兔子的双耳和周围的皮肤，覆盖兔子，这样就只露出两只耳朵。

一只耳朵将变得缺血，而另一只耳朵用作对照。用于手术的器械是一把带有 15 号刀片的手术刀，两对拾取器，一对用于皮肤，另一对用于其他软组织。三个蚊夹、一两对弯曲的微型剪刀、一把用于切割缝合线和坚韧组织的小剪刀、一个持针器和一些不锈钢冲头。

通过根据动脉和静脉识别三个血管蒂来开始手术。使用 15 号刀片。小心地在中央血管蒂上做一个垂直的皮肤切口。

中央静脉与周围组织隔离并保护它。此步骤环绕。用于回缩的中央静脉。

自由解剖中枢神经。它通常在静脉的 coddle 侧。神经被剪刀剪断。

自由解剖中央动脉。它通常在颅侧，比静脉更深，系紧动脉并将其分开。清理耳软骨上方中央静脉周围的组织。

在 coddle 蒂上做第二个皮肤切口。保留捆绑包。这些血管被自由解剖并包围以保护。

当静脉很大时，这尤其有用，就像这只兔子一样。在这个切口和第一个切口之间挖一条隧道。切开软骨上的皮下组织。

在颅束上做第三个皮肤切口。这整个束被连接和分离。第三束的皮肤被切开。

这条静脉非常靠近皮肤，所以不要切得太深。然后将整个血管束解剖、打结和分离。用刀和剪刀，做一个皮下隧道。

这三个切口终止了所有皮下组织、肌肉、神经和小血管分支。使用额外的锋利和钝性解剖来清理基底，留下大约 5 到 10 毫米宽的裸露软骨。出血可以通过纱布压力来控制。

电烙术是不必要的。耳朵内的皮肤没有被割伤，因为它不携带太多血液。该程序的重要方面是确保在保护血管的同时充分解剖皮下隧道。

这不应该是一个如此困难的过程。止血后，用四条或五条缝合线缝合三个皮肤切口，并再次检查以确保皮肤切口正确闭合且未见出血 伤口药物测试，四条。可以用 6 毫米不锈钢冲头在每只耳朵的腹侧形成圆形全层皮肤伤口。

伤口之间的距离至少为 20 至 30 毫米。冲头内的皮肤和软骨膜被去除，但软骨没有受损。在双耳形成伤口后，用纱布暂时覆盖它们，并将兔子转移到手术室进行药物应用。

清除伤口上的任何血凝块后，使用试验和控制药物。伤口用封闭敷料覆盖，以防止干燥。比较两种药物时，将每种药物涂抹在近端和远端伤口上。

这控制了术后远端和近端耳伤口愈合率的差异。缺血性耳通常会变得凉爽和发绀，切口远端的感觉减弱。轻度 I 型水肿可能会持续几天，但会自行消失，无需治疗。

中央动脉搏动消失。耳朵运动减少，但并未完全消除，因为一些肌肉仍然附着在耳根上。如果隧道制作正确，可以在切口之间看到明显的压痕。

太尼贴剂贴在背部皮肤上，以缓解可能的术后疼痛。每天用温度计测量每只耳朵的皮肤温度。使用经皮氧分压计或激光多普勒流量计测量耳部的血液循环。

一周后，可以从 2007 年开始移除皮肤切口的缝合线。该程序已在 70 多只兔子中使用。这包括 23 只糖尿病兔子和 4 只老兔子。

非缺血性和缺血性耳朵之间的温差在 1 到 10 摄氏度之间，大多数兔子在 2 到 6 摄氏度之间。术后初期温差较高，第 15 天后逐渐减小，但 1 个月末仍维持。从每只耳朵采集 6 个组织样本，并通过 HPLC 测量高能磷酸盐含量，包括 TP 和总能量。

正常耳的浓度高于缺血性耳。在 15 只非糖尿病兔子中，非糖尿病和糖尿病动物缺血耳的伤口愈合时间总是比非缺血耳长。非缺血性耳的平均愈合时间为 17.8 天，而缺血性耳的平均愈合时间为 21.8 天。

在 10 只 12 个月大的糖尿病动物中，非缺血性耳的平均愈合时间为 18.3 天，而缺血性耳的平均愈合时间为 29.1 天。在包括糖尿病兔在内的所有动物中，皮肤切口正常愈合，兔子没有任何并发症。糖尿病时间 24 个月，腹侧伤口更容易感染。

此功能使其更接近人类糖尿病患者的伤口。组织学样本显示皮下隧道愈合，其中肌肉缺失并被纤维组织取代。但是，皮肤是完整的。

在尝试此程序时，重要的是要记住以人道的方式对待动物。一旦掌握，这项技术可以在不到一小时的时间内完成。我们已经在 70 多只兔子中使用了这项技术，其中包括 23 只糖尿病兔子，没有任何并发症，如出血或感染。

遵循此程序是一个非常安全的程序。可以执行其他方法，如额外缺血、神经损伤和细菌接种，以回答其他问题，例如血管性溃疡、压疮和糖尿病性神经病变。