An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

该程序的总体目标是展示如何在果蝇宿主上维持寄生蜂的培养物，以及如何解剖淋巴腺和脂肪体。这是通过首先在果蝇幼虫上培养黄蜂来实现的。然后解剖动物以分离幼虫淋巴腺，这涉及剥去角质层并去除脂肪体和其他更精细的结构以分离淋巴腺。

同样，可以使用免疫细胞化学和荧光显微镜的类似程序来分离脂肪体本身。基因表达和细胞特异性变化在免疫组织中可视化。黄蜂侵扰后，我们研究了一种利用果蝇软管及其寄生黄蜂的独特感染和免疫系统。

我们的实验室是为数不多的维持果蝇寄生虫活体培养物的实验室之一。因此，我们经常被要求分享我们的技术。类寄生虫是许多昆虫的天敌。

我们研究的物种攻击许多果蝇物种的幼虫阶段。在实验室中，我们使用果蝇 melan gastro 来了解昆虫的免疫系统如何受到寄生虫攻击的影响。其次，我们想发现 wass 用来克服宿主防御的策略。

一般来说，刚开始解剖脂肪体和淋巴腺的人会很挣扎，因为虽然 oph 幼虫很容易生长，但它们的体积相当小，并且需要相当熟悉才能轻松常规解剖这些 laval 器官。在发现 NF κ B 信号转导的组成型激活导致细胞组织的自身免疫样包膜后，我们开始好奇这种反应在 oph fla 突变体中是如何发生的。因此，我们假设诱导包埋是其自然对应物，并制定了这些标准方案，我们将展示今天，我现在将演示如何准备和维持黄蜂培养物。

首先准备一个新鲜的苍蝇食品小瓶，加入一小滴新鲜制备的酵母糊。将 50 到 60 只年轻的野生型果蝇转移到小瓶中，在 24 摄氏度下产卵 48 小时。产卵两天后，从小瓶中取出苍蝇，并在蜂鸣塞中加入一滴蜂蜜。

最后，重新盖上小瓶。在麻醉黄蜂之前降低二氧化碳流量，因为它们比苍蝇对气体更敏感。准备好麻醉黄蜂后，挑选出 6 到 8 只雌性黄蜂和 6 到 8 只雄性黄蜂，并将它们添加到小瓶中。

与果蝇卵和幼虫一起。轻轻地将小瓶侧放，直到黄蜂醒来。然后将样品瓶放入 24 摄氏度的培养箱中。

未受影响的 gilo 宿主和成功保护自己的宿主会在正常发育时间点进行幼崽绘画。他们可以在 黄蜂 e 爆炸之前去除。黄蜂通常在 AC 关闭大约 25 到 30 天，以准备处于相同发育阶段的黄蜂。

2 到 6 小时内产下的寄主卵饲养黄蜂，而不是 48 小时，以收获受感染的幼虫用于解剖免疫组织或寄生虫。将果蝇瓶的内容物转移到一个小玻璃或塑料培养皿中。然后使用立体显微镜找到镊子，小心地挑选 6 到 10 只幼虫。

先将幼虫放入装有 1 个 XPBS 的井中，然后依次转移到水、70% 乙醇水和 1 个 XPBS 中。这些步骤的目的是让动物摆脱苍蝇食物，并彻底清洁和消毒它们的表面。在 Zes 1000 解剖显微镜的解剖台上，放置一个灯箱，使入射光能够透射样品。

使用细镊子，从 PBS 中选择清洁的游荡第三龄幼虫。将幼虫放在显微镜载玻片上。使用镊子将动物腹侧朝上定位。

将光源平铺，使其远离样品，使生物体看起来透明且可以看到内部器官。当您将幼虫转移到载玻片上时，您需要确保没有过量的 PBS，因为这有时会使切片更加困难。使用两对镊子，将动物握在后端的两侧，轻轻拉动角质层，在角质层中引入一个小的浅表撕裂。

含有 he cytes、肠道和脂肪体的血淋巴液将开始从体腔中逸出。如果需要，可以用 10 微升移液器手吸取血淋巴液进行涂片，小心地将两个镊子放在动物左侧的口钩下方。轻轻撕开角质层。

将两个镊子移动到动物右侧的口钩下方，然后小心地再撕一小口。现在，在握住动物的口钩的同时，轻轻地将角质层向动物的后端剥离。随着角质层被拉回，脑脂肪体想象中的椎间盘、唾液腺和经证实的心室将暴露出来。

后端分离的角质层有背血管，上面附有淋巴腺。淋巴腺位于大脑下方。切开经过验证的心室并将其从淋巴腺区域移开。

小心地从淋巴腺中梳理掉脂肪、身体、肠道、唾液腺和其他结构。小心不要将跛行的腺体从位于大脑后方的环形腺体和背血管上分离。将淋巴腺平放在显微镜载玻片上，小心地去除所有其他组织，直到整个腺体从前叶展开到最后一组心包细胞。

腺体现在可以在 Zes 1000 解剖显微镜的解剖台上进行固定和染色。放置一个允许入射光透射样品的灯箱。将清洁后的第三龄幼虫放在显微镜上。

加入 200 微升 1 XPBS。将光源从样品上倾斜，使生物体看起来透明且可以看到内部器官。使用镊子定位动物，使前端远离您。

在下一步中，重要的是要注意镊子的位置，以确保只撕裂角质层而不接触内部器官。用一对镊子，将幼虫的角质层固定在嘴的左侧，用另一个镊子钩住。轻轻地将另一侧的角质层撕到后端。

在将后端的角质层从身体上撕下之前停止，非常轻柔地开始将肠道切除到一侧。轻轻去除脑想象盘和环形腺，淋巴腺穿过背血管。最后，轻轻去除脂肪体两侧的角质层。

不要去除唾液腺，因为这些腺体的两侧都有脂肪体。在继续固定和染色组织之前，请务必去除 PBS。解剖良好的脂肪体样品应保持正常的细胞接触，并且解剖样品周围应具有最少的脂肪球。

黄蜂侵染对基因表达的影响在体内可视化。在未感染的对照动物中使用与 Theso Mycin 启动子相连的 GFP 报告基因，未检测到 GFP 表达。而 GFP 信号在从感染 l Victoria 的动物解剖的脂肪体的细胞质中清楚地检测到。

解剖淋巴腺以观察 El Victoria 感染后前叶诱导的细胞变化。在叶的外围可以看到由畸形增强子驱动的 GFP 标记的新分化细胞。正常情况下，腺体持续围绕着肺叶。

然而，这些腺体中前叶的完整性被破坏了，因为在黄蜂感染这些相同的解剖后，基底膜是不连续的。在涂片中可以看到血淋巴中的细胞。一些淋巴细胞以胶囊形式参与以阻止寄生虫发育以检测 betzel 表达。

解剖的淋巴腺。淋巴腺在体内用多克隆抗 schpeil 抗体染色。与未感染的对照组相比，黄蜂感染后淋巴腺细胞中的 Schpeil 水平升高。

在尝试此程序时，重要的是在所需的生物年龄制备食管培养物。轻柔地对待它们，以免手动作诱发免疫反应。按照这个程序，我们可以使用解剖的器官、脂肪体和淋巴腺来使用提取的 RNA 或蛋白质提取 RNA 和蛋白质。

我们可以进行 PCR 或 Westin 分析来研究基因和蛋白质表达。看完这个视频后，你应该对如何成长有一个很好的了解。寄生虫在果蝇宿主上，对免疫组织进行解剖，用于免疫组织化学和其他应用。