实验小鼠模型阴道接种和样品采集的协议念珠菌阴道炎
December 8th, 2011
在评价中使用的关键技术念珠菌阴道炎在实验动物模型进行了描述。该方法将允许从阴道标本和淋巴细胞的快速收集，排水腰淋巴结。这些技术可能会引起女性下生殖道的其它疾病的小鼠模型。
该程序的总体目标是证明与使用阴道念珠菌病的实验动物模型作为量化阴道真菌负荷的手段相关的特定程序问题，以及在免疫学和组织学测定等特定测定中使用阴道或淋巴细胞。这将通过首先在雌激素处理的小鼠上演示阴道接种技术来实现。接下来，在对小鼠实施安乐死后，将进行阴道灌洗以恢复念珠菌。
然后提取阴道组织和/或阴道引流淋巴结。灌洗液可以在显微镜下观察以显示与阴道上皮细胞相关的念珠菌，或接种在琼脂上以量化阴道真菌负荷。细胞组分的弥散条带也可用于上皮细胞和淋巴样细胞的染色。
因此，演示这项技术的主要优点是，阴道炎动物模型的用户可以最有效地做到这一点。通过该技术回答的关键问题是阴道炎和生态学领域，并回答了宿主免疫反应、细胞分布、药物疗效、免疫治疗效果以及免疫效果和演示该技术等关键问题。今天将是我实验室的研究生 junco yano，在注射 β 雌二醇三天后用白色念珠菌感染一只小鼠。
首先将鼠标稳定在平坦的 gRED 表面上，以便其抓握。然后用两根手指握住尾巴的根部，向上抬起臀部，使阴道口朝向您。将移液器吸头插入阴道腔约 5 毫米深处，吸取多达 20 微升的接种物悬浮液。
尽可能快速、轻柔地完成此步骤，以最大程度地减少鼠标的痛苦。在所需的孵化期之后，根据您所在设施的方案对动物实施安乐死。然后用两根手指将鼠标的尾巴根部向下按住，以便用移液管露出阴道口。
将 100 微升无菌 PBS 引入阴道腔，反复抽吸和搅动，进行灌洗。如果移液器吸头被细胞堵塞，请分配阻塞细胞并继续用剩余的 PBS 进行破坏。将灌洗液收集在微量离心管中。
阴道灌洗程序后，将鼠标仰卧并用 70% 乙醇浸透腹股沟区域。使用一对镊子向上提起尿道口，使阴道口暴露出来。将一对弯曲的镊子插入阴道腔并定位子宫颈，同时保持对镊子的牢牢握住。
通过阴道腔提取子宫颈，切除阴道口底部的阴道，然后用手术剪刀从阴道中取出子宫颈。因为阴道组织是退化的，所以将其倒置以保持原来的方向，或者通过做一个侧切口将其打开成片状，让动物仰卧在腰椎间进行腰淋巴结切除。用 70% 乙醇浸透腹部。
从下腹部开始到胸部做一个侧切口，用双手用一对镊子露出内脏。向上移动肠道，使中央血管变得可见。找到下静脉 cva 和腹主动脉。
可以在腹主动脉附近识别一对腰椎淋巴结，位于肾动脉和髂总动脉起点之间的大约中间位置。这些淋巴结可以通过其弹性质地在视觉上与脂肪组织区分开来，并且与脂肪组织相比，它们更轻且颜色更不透明。与未接种的动物相比，它们在受感染的动物中也明显更大。
动物通过在淋巴结下方放置微型镊子来切除淋巴结，然后轻轻向上拉以将它们与周围组织分开。切除组织后，将淋巴结转移到无菌金属丝网上，该筛网放置在含有约 10 毫升 Hank 平衡盐溶液的无菌玻璃培养皿内。要分离淋巴细胞，请参阅书面方案。
至少在 4 天前接种的小鼠阴道灌洗液的细胞组分通常由念珠菌、上皮细胞和细胞浸润组成，如此处通过湿装显微镜显示。念珠菌可以通过 PHA 和酵母的存在来识别。在这里，阴道灌洗液的涂片制剂被染色。
使用子宫颈抹片检查技术检查上皮细胞和浸润白细胞，其中主要细胞是中性粒细胞，这可以通过 traclear 叶来识别。在未接种的小鼠中检测到极少的中性粒细胞（如果有的话）。该图显示了阴道真菌负荷的一个例子。
在特定时间点收集阴道灌洗液并培养以进行 CFU 计数。在本例中，在接种后第 5 天收集液体，连续收集，稀释铺板，并孵育 48 小时。然后计数菌落，计算阴道真菌负荷阴道定植或念珠菌感染在雌激素处理的接种小鼠中持续数周。
虽然念珠菌未能在未雌激素处理的接种小鼠中建立阴道定植，但雌激素处理的未接种小鼠在整个时间内对念珠菌保持阴性。此外，阴道灌洗可以在每个时间点对不同的小鼠进行一次，也可以在麻醉下对同一只小鼠纵向进行。在尝试此程序时，重要的是要记住安全地约束动物以避免对阴道造成创伤，并且请花必要的时间彻底灌洗，以便在提取阴道组织时获得准确的阴道真菌负荷。
使用静止的 PBS 以防止它们脱水，并且在去除淋巴结时请注意不要损坏主要静脉和动脉，并且在处理淋巴结细胞时，将它们放在冰上或四度以保持细胞活力。观看此视频后，您应该对如何利用念珠菌阴道炎的实验小鼠模型来可重现地量化阴道真菌负荷并切除阴道或淋巴组织以进行特异性免疫学或组织学测定有一个很好的了解。
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概述
本文介绍了使用实验动物模型评估念珠菌性阴道炎的关键技术。这些方法有助于快速收集阴道标本和来自腰部淋巴结的淋巴细胞，可能导致其他女性下生殖道疾病的小鼠模型。
关键研究组成部分
科学领域
- 神经科学
- 微生物学
- 免疫学
背景
- 念珠菌性阴道炎是一种影响女性生殖道的常见疾病。
- 了解免疫反应对于开发治疗方法至关重要。
- 实验模型有助于研究疾病机制。
- 可以使用特定的测定法来量化阴道念珠菌病。
研究目的
- 展示研究阴道念珠菌病的程序技术。
- 在实验模型中量化阴道真菌负担。
- 在免疫学测定中利用阴道和淋巴细胞。
使用的方法
- 在雌激素处理的小鼠上进行阴道接种技术。
- 在小鼠实验结束后进行阴道冲洗以恢复念珠菌。
- 提取阴道组织和淋巴结。
- 显微镜检查和将冲洗液接种在琼脂上。
主要结果
- 成功从阴道冲洗液中恢复念珠菌。
- 使用琼脂接种法量化真菌负担。
- 通过染色鉴定上皮细胞和淋巴细胞。
- 展示模型对未来研究的可行性。
结论
- 概述的技术为研究阴道念珠菌病提供了一种稳健的方法。
- 该模型可用于研究女性下生殖道的其他疾病。
- 未来的研究可以在这些发现的基础上探索免疫反应。
常见问题
Executive Industry Relevance
The experimental mouse model of Candida vaginitis provides a robust platform for quantifying vaginal fungal burden and evaluating host immune responses in a controlled, disease-relevant system. This model enables reproducible assessment of infection dynamics and immunological endpoints, supporting early discovery and mechanistic de-risking for antifungal and immunotherapeutic candidates. Its translational alignment with human infection properties enhances predictive confidence for preclinical portfolio decisions.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables interrogation of host-pathogen interactions and immune response mechanisms in a physiologically relevant context.
- Supports functional target validation by quantifying infection and immune cell infiltration without immunosuppression confounders.
- Facilitates mechanistic de-risking for antifungal and immunomodulatory strategies.
Screening & Assay Development
- Provides standardized protocols for inoculation, sample collection, and fungal burden quantification.
- Delivers reproducible, quantitative outputs such as CFU enumeration and immune cell profiling.
- Enables longitudinal sampling from the same animal, supporting robust assay development and screening workflows.
Translational & Preclinical Research
- Aligns with human infection immunology, enhancing translational relevance for candidate evaluation.
- Supports continuity from discovery through preclinical validation by enabling immunological and histological endpoint analysis.
- Permits risk-adjusted advancement of antifungal and immunotherapeutic leads based on quantitative infection and immune readouts.
Pipeline & Workflow Integration
This model integrates into the discovery-to-preclinical continuum by enabling hypothesis testing, target validation, and quantitative assessment of infection and immune responses.
- Discovery Biology: Supports hypothesis-driven studies of host-pathogen interactions and immune mechanisms.
- Screening: Provides validated, reproducible assays for fungal burden and immune cell quantification.
- Analytics: Generates quantitative outputs (CFU counts, cell profiles) for comparative analysis across experimental conditions.
- Translational Research: Offers continuity for immunological and infection endpoints relevant to human disease.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable platform for evaluating diverse infectious and immunological hypotheses in the lower female genital tract.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in antifungal and immunological research.
- Operational Value: Standardizes infection and sampling protocols for reproducibility and scalability.
- Strategic Value: Informs go/no-go decisions and enhances capital efficiency by providing robust preclinical data.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization and advancement of therapeutic candidates targeting mucosal infections.
Implementation Considerations
- Requires expertise in animal handling, infection models, and immunological assays.
- Needs access to instrumentation for sample collection, microscopy, and quantitative plating.
- Demands cross-team standardization of protocols for reproducibility across studies.
- Adaptable to other infectious disease models of the lower female genital tract with protocol modifications.
- Careful handling and sample processing are critical to maintain cell viability and data integrity.
