小鼠浅表淋巴结手术

该程序的总体目标是通过手术切除麻醉小鼠的淋巴结。这是通过首先定位淋巴结来实现的。采集淋巴结，然后闭合切口。

最后，可以获得单细胞悬液进行实验分析。最终，可以通过流式细胞术评估活的淋巴细胞群。这项技术的视觉演示至关重要，因为需要查看淋巴结定位和切除才能掌握。

麻醉小鼠后，涂抹眼药膏，注射丁丙诺啡并通过捏脚趾确认镇静，然后将鼠标侧向。首先，定位肱淋巴结，然后剃除要解剖的区域。刷掉任何松散的毛发后，在该区域涂抹消毒剂，然后在四条腿的背面做一个约 5 毫米的小切口。

使用两对镊子拉伸切口，直到肱淋巴结看起来比周围的脂肪更灰或更暗。然后用一对镊子捏住覆盖淋巴结的筋膜。将第二对镊子尽可能放在淋巴结下方，轻轻拉动膜，不要破坏周围组织。

然后使用第一对镊子打破筋膜并切除淋巴结。如果淋巴结已被成功采集，则淋巴结先前所在的位置会出现血迹。如果淋巴结下沉，请将切除的淋巴结放入等渗溶液中，这将确认收获的组织是淋巴结而不是脂肪。

接下来，确认伤口中没有毛发，并根据切口的大小，将皮肤的两个内部粘在一起，并用一到两个夹子缝合它们来闭合切口。现在定位腹股沟淋巴结并剃除要解剖的区域。刷掉任何松散的毛发后，在该区域涂抹消毒剂，然后在靠近腹部的后爪上方做一个约 5 毫米的小切口。

如刚图所示的肱淋巴结，用两对镊子打开切口后，确定位于周围脂肪组织中的腹股沟淋巴结。然后用两对镊子切除淋巴结，如刚才所示。同样，通过注意淋巴结先前所在位置出现的血迹来确认淋巴结的成功收获，然后将腹股沟淋巴结放入单独的等渗溶液容器中。

收获所有淋巴结后，将老鼠放入笼子中并加入湿粮，以便老鼠轻松进食。手术后大约 6 到 8 小时后，检查鼠标以确保它没有感到疼痛。仔细观察姿势、步态与同生体的相互作用以及皮毛的外观与正常健康小鼠相似。

最后，通过将淋巴结压在培养皿中的磨砂载玻片上来解离淋巴结，然后将其转移到试管中以获得单细胞悬液。对细胞进行目标细胞表面抗原染色后，通过流式细胞术分析细胞。在这里，样品正向和侧面，显示了从麻醉或处死动物收获的淋巴结的散点图。

两个散点图的活淋巴细胞门中细胞的图谱和百分比相同。证明淋巴结手术是一种合适的细胞采集技术一旦掌握了淋巴结手术，如果作得当，每只小鼠可以在 5 到 10 分钟内完成手术。