使用Xpert MTB/RIF检测法诊断肺结核

本实验的总体目标是在两小时内，对咳出的痰液或浓缩的痰沉渣样本，同时检测结核分枝杆菌、结核病以及利福平耐药性。首先采用一种简单且高效的样本去污染方案，然后将每个处理后的样本转移至一次性使用的专用 M-T-B-R-I-F 检测 cartridge 中，该 cartridge 内含 PCR 试剂并承载 PCR 反应过程。

将试剂盒装载到 Gene Expert DX 系统上，启动超灵敏 HEMI 巢式 PCR，用于同时检测结核分枝杆菌和利福平耐药性。最终读取检测结果并报告给医生。Expert MTB/RIF 检测法适用于临床怀疑患有肺结核且符合公司文本中所述标准的患者的样本。

请注意，该方法不应用于监测药物治疗的效果。Crystal。我实验室的一名技术人员现在将演示该方案，依据结核病诊治国际标准的第二条。对每位疑似患有肺结核的患者，应采集两份标本用于细菌学检查。

每个检测样本分配一个基因专家DX系统模块，并根据样本编号对每个 cartridge 进行标记。针对每个样本检测，使用另一支无菌移液管将一毫升痰液转移至一个15毫升带螺帽的锥形管中。加入两毫升M-T-B-R-I-F样本试剂。

用力盖上盖子，将试管剧烈振荡10至20次。振荡后，将试管在室温下静置5分钟。

再次于室温下平衡10分钟。确认所有样本标本均已去污化，且无可见的痰液凝块。首先，用每份痰沉渣样本的标本编号标记相应的 cartridge。向每份沉渣样本中加入1.5 mL M-T-B-R-I-F 样本试剂，并转移0.5 mL至一个15 mL带螺口盖的锥形管中。盖上管盖，涡旋振荡30秒，随后将管子垂直放置，静置5分钟。

涡旋混匀后，将离心管直立静置10分钟。检查液化后的样本，确认无痰液凝块存在。核对离心管上的标签与相应的 cartridges。

在准备进行检测之前，请勿打开试剂盒，并在打开试剂盒盖后的30分钟内使用。使用无菌移液管吸取液化的样本，直至液面高于最低刻度线。将样本缓慢加入试剂盒中。

关闭试剂盒盖子。在将样本加入试剂盒后的30分钟内开始检测。首先打开计算机，然后打开桌面上的仪器。

双击 Gene Expert DX 图标。登录系统软件。选择“创建测试”以打开扫描试剂盒条形码的对话框。

然后输入样本编号并扫描 cartridge 上的条形码。当出现创建测试窗口时，单击“开始测试”，并在对话框中输入密码。现在打开仪器模块门，装入 cartridge。

关闭舱门以开始测试。当绿灯熄灭时，测试完成。系统释放舱门锁后，打开模块舱门并取出 cartridge。

最后，将使用过的检测卡放入适当的废弃物容器中处理。每张检测卡均包含用于结核分枝杆菌复合群利福平耐药性的实时荧光定量PCR所需的试剂，以及相应的实验对照。探针检测对照用于验证试剂重悬、PCR管在检测卡中的填充情况、探针完整性及染料稳定性。

样本处理曲线可作为目标细菌处理充分性的阳性对照，同时指示是否存在任何PCR抑制物。引物设计用于区分保守的野生型序列与RPOB基因核心区域中与利福平耐药相关的突变。CT值与测试样本中目标结核分枝杆菌DNA模板的浓度成反比。

检测结果对话框显示，该患者样本中结核分枝杆菌（MTB）靶DNA被检出，且未检出利福平（RIF）耐药。结核分枝杆菌（MTB）靶DNA在低水平被检出，并提示存在利福平耐药。SPC和PCC两项对照均符合预设的可接受标准。

该检测结果被视为无效，因为SPC为阴性且未扩增出PCR产物。可能原因是样本未正确处理或PCR受到抑制。请重复该检测。

正如您在视频测试中所见，该方法已实现标准化，仅需中等程度的实验室基础设施和培训。因此，我认为专家型M-T-B-R-F检测法有望将标准化、高灵敏度且特异性极强的结核病及利福平耐药诊断技术推广至各级基层医疗场所，实现普遍可及。