Name: 根结线虫的高和低通量筛选根结线虫。 /em (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 46 s
Description: 了解根结线虫高通量和低通量筛选方法，用于植物病理学和抗病育种研究。本视频演示了利用生长袋和盆栽系统评估植物感染状况的标准化流程，为抗性品种选育提供可重复的技术方案。

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Kaloshian 实验室的研究由美国国家食品与农业研究所（2007-35607-17765）的资助项目支持。Roberts 实验室的研究由美国国际开发署（GDG-G-00-02-00012-00 和 EDH-A-00-07-00005）以及加州干菜豆咨询委员会的资助项目支持。

1. 番茄幼苗在花盆和育苗盘中的生长
<ol>
 <li>进行盆栽试验时，将番茄种子种植于单个花盆中，使用富含有机质的土壤，如Sunshine培养基。在22-28°C的温室中培养。发芽后，每周施用一次Miracle-Gro肥料。</li>
 <li>发芽约两周后，在两片真叶期，将幼苗单独移栽至装有无菌沙质土壤的花盆中（直径10 cm，深度17 cm），土壤组成为90%沙子和10%有机混合物。添加Osmocote缓释肥料，并在22-28°C温室中继续培养两周。此后仍需每周施用一次Miracle-Gro肥料。</li>
 <li>对于高通量筛选，可直接将种子播种于盛有沙质土壤的育苗盘中，用塑料薄膜覆盖育苗盘直至种子发芽，并按上述条件进行培养。发芽后，添加Osmocote缓释肥料，并每周施用一次Miracle-Gro肥料。</li>
</ol>
2. 在种子袋中种植豇豆幼苗
<ol>
 <li>将种子置于铺有多层Kimwipe纸的培养皿中萌发，然后单株转移至育苗袋中，或直接放入育苗袋的纸槽内进行萌发。</li>
 <li>将育苗袋放入塑料悬挂式文件夹中，每文件夹放置两个，并将文件夹垂直置于支架上。将支架放入温度控制在25–28 °C、光照周期为16小时光照/8小时黑暗的环境培养室中。支架也可置于温室中培养，但需在植株茎的两侧用铝箔或硬纸板覆盖支架，以减少真菌污染的风险。</li>
 <li>每天用反渗透水浇灌育苗袋一次或两次。播种后约10至14天，当形成具有三级根尖的完整根系时（图1），幼苗即可进行接种处理。</li>
</ol>
3. 线虫卵的提取
从感病根部提取卵的方法经由 Hussey 和 Barker（1973 年）建立的方案修改而来。
<ol>
 <li>在接种线虫前3至4天，从感染的番茄根部提取根结线虫卵。开始卵提取前，用热水彻底清洗工作区域，以避免污染。同时用热水清洗一个搅拌器、两个桶、一个金属网架、一个橡胶锤、孔径分别为425、90和25 μm的三只筛子、一个量筒和剪刀。</li>
 <li>将筛子按从上到下的顺序叠放：425、90和25 μm孔径。卵将收集在底部的25 μm筛子上。将叠好的筛子放在置于水槽中的金属网架上，并在金属网架下方放置一个桶，用于收集滤过液。</li>
 <li>剪去作为接种源的感病植株地上部分并丢弃。小心地将植株从盆中取出，通过在盛满水的塑料桶中浸泡的方式清洗根部，再用流动水进一步冲洗，直至根部附着的土壤颗粒完全清除。</li>
 <li>用剪刀将根部剪成小段，并丢弃主根。</li>
 <li>将单株植株的切碎根段放入一个带盖的大塑料罐中，加入适量10%次氯酸钠溶液，刚好浸没根段，然后盖上盖子。</li>
 <li>摇动装有根段的塑料罐2分钟。</li>
 <li>打开罐子，将内容物倒入最上层筛子，并使用连接雾化喷嘴的软管冲洗。充分冲洗直至完全去除漂白剂气味。用橡胶锤轻敲筛子侧壁，防止筛孔堵塞。</li>
 <li>移去最上层筛子，冲洗第二层筛子上的残渣。</li>
 <li>移去第二层筛子，收集最下层筛子上的细小残渣（其中包含线虫卵）。用洗瓶中的细水流将残渣冲至筛子一侧，然后将残渣和卵连同少量水一起收集到一个洁净的烧杯中。</li>
 <li>将桶中收集的滤液再次通过25 μm筛子过滤一次，以回收可能漏过的卵。用清水充分冲洗，并将收集物并入同一烧杯中。</li>
 <li>丢弃最上层筛子中的植物残渣，并用加压水彻底清洗所有三只筛子。切勿触碰筛网部分，以免改变孔径大小。</li>
</ol>
4. 孵化线虫卵
<ol>
 <li>用几层 Kimwipe 擦镜纸衬垫一个洁净的金属篮，并将其置于玻璃培养皿上，确保篮子底部与培养皿之间保持 1 cm 的距离。</li>
 <li>将提取的线虫卵倒入金属丝篮中的纸上。加入适量液体，使金属丝篮的底部接触水面但不浸入水中。用塑料盖盖住顶部。</li>
 <li>每天检查水分蒸发情况，并向培养皿中添加适量水，确保篮子底部始终接触水面，以防止卵干燥。</li>
 <li>每隔一天，将含有 J2 的水从培养皿中收集至烧杯中。若不能立即使用，需在室温下利用实验室气源或水族泵产生的空气对收集的接种液进行通气。通气后的接种液应在 2 天内使用。J2 可在孵化装置中持续收集 6–8 天。</li>
</ol>
5. 盆栽或托盘中番茄根部接种及侵染评价
<ol>
 <li>取三份收集的线虫样品，在计数载玻片或培养皿中统计二龄幼虫（J2）的数量，计算平均值，并确定接种所需的体积。通常每盆植株使用3000条J2，育苗盘中生长的植株每株使用500条J2。</li>
 <li>在磁力搅拌器上以低速搅拌接种液。</li>
 <li>在接种植物前，确保土壤湿润但不过于潮湿。对于盆栽接种，使用铅笔在每株番茄根系周围的沙土中打三个深度约为半盆的孔（图2）。用移液器将J2分别加入三个孔中，完成每株植物的接种，之后覆盖孔洞。</li>
 <li>对于育苗盘中的高通量筛选，可使用经改造的带侧孔密封针头——将其侧边打孔后粘接到5 mL移液器吸头，并连接移液器（图3），将J2注入土壤中。或者，也可按照步骤5.3的方法进行线虫接种。</li>
 <li>将植株置于温室中，在24–27°C条件下培养6至8周。每月施用两次Miracle-Gro肥料。</li>
 <li>为评估侵染情况，小心地将植株从盆中取出，并清洗根部（清洗方法如步骤3.3所述）。</li>
 <li>将根部浸入1 mg/L 的赤藓红（erioglaucine）溶液中染色15分钟，使卵块呈现蓝色。</li>
 <li>用清水冲洗根部，通过计数单个根系上的染色卵块进行评估。可使用带光源的台式放大镜辅助观察卵块。</li>
 <li>若筛选后的植株需用于进一步的遗传学研究，在清洗根部评估前不要剪除地上部分。完成染色和卵块计数后，将幼苗移栽至有机土壤中，大幅修剪地上部分以减少蒸腾作用，并在温室中继续培养。</li>
</ol>
6. 豆科植物豇豆根部在培养袋中的感染及感染评估
<ol>
 <li>计数线虫接种物，并如前所述在磁力搅拌器上搅拌。</li>
 <li>从悬挂式文件夹中取出种植袋，平放在水平表面上。每袋接种5 ml悬浮液，其中含1500条J2幼虫。掀开种植袋的塑料盖，将线虫均匀分布在根系表面。</li>
 <li>接种后将种植袋保持水平放置24小时，并用深色纸覆盖以避光，之后放回生长室内的悬挂式文件夹中。</li>
 <li>根据需要每天浇水一至两次，使用半浓度Hoagland营养液（Hoagland &amp; Arnon, 1950；表1），直至观察到植株对肥料产生反应，通常表现为叶片明显转绿和地上部分生长更旺盛。通常连续3天使用半浓度Hoagland营养液进行浇灌。此后仅用水保持种植袋湿润。</li>
 <li>接种后约30天（范围为28–35天），向每袋注入约10–20 ml浓度为75 mg/L的亮蓝染料（erioglaucine）。将种植袋平放并用染料完全浸没过夜。</li>
 <li>排干种植袋中的液体，使用带光源的台式放大镜计数根系上的卵块数量。</li>
 <li>若筛选后的植株需用于进一步的遗传学研究或育种工作，应小心将根系从纸袋中取出，移栽至装有有机土壤的花盆中，并在温室中继续培养。</li>
</ol>
7. 典型结果
图 1 和 2 展示了所述两种系统中用于线虫接种的番茄和豇豆植株的适宜生长阶段。此外，图 4 和 5 展示了番茄和豇豆根部被良好侵染的示例。与大多数抗病性筛选实验类似，建议每种基因型至少使用 6–10 株植物进行线虫接种，以计算平均侵染率。通过使用大小一致的植株以及精确控制接种物的数量和施加方式，可降低相同基因型植株间线虫侵染的变异程度。
使用托盘和生长袋可以在较小的生长空间内对数百至数千株植物进行筛选。生长袋还能够快速、高效地对根结线虫感染进行无损评估，无需清洗根系（图4）。
<img alt="植物根系生长，水培实验，透明塑料培养皿中的幼苗，教育与科研用途。" src="/files/ftp_upload/3629/3629fig1.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 1"> 
图 1. 生长两周的豇豆植株，培养于种植袋中，已准备好进行根结线虫接种。
<img alt="在塑料花盆中观察番茄植株生长；植物发育的植物学研究。" src="/files/ftp_upload/3629/3629fig2.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 2"> 
图 2. 一株三周龄的番茄植株，准备进行根结线虫接种。
<img alt="光纤探针、光谱装置、光学测量、光传输分析示意图。" src="/files/ftp_upload/3629/3629fig3.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图3"> 
图3. 一种用于高通量接种线虫的改良针头和移液器吸头。将针头底部密封，并用激光束在针头上钻出三组小孔。随后，将改良后的针头粘接到一个5 ml移液器吸头上。
<img alt="根瘤共生、固氮作用、示意图；豆科植物中土壤细菌的相互作用。" src="/files/ftp_upload/3629/3629fig4.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图4"> 
图4. 被根结线虫侵染的番茄根系。
<img alt="根系结构图，显示与蓝色染色菌丝共生的植物根系。" src="/files/ftp_upload/3629/3629fig5.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Figure 5"> 
图5. 接种后30天、28 °C条件下培养的豇豆根系，卵块用亮蓝染色。

<ol><li>Bhattarai, K. K., Xie, Q. G., Mantelin, S., Bishnoi, U., Girke, T., Navarre, D. A., Kaloshian, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tomato+susceptibility+to+root-knot+nematodes+requires+an+intact+jasmonic+acid+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Plant+Microbe+Interact%22%5BJournal%5D)">Tomato susceptibility to root-knot nematodes requires an intact jasmonic acid signaling pathway.</a> Mol. Plant Microbe Interact. 21, 1205-1214 (2008).</li>
<li>Ehlers, J. D., Matthews, W. C., Hall, A. E., Roberts, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inheritance+of+a+broad-based+form+of+root-knot+nematode+resistance+in+cowpea%5BTitle%5D)+AND+%22Crop+Sci%22%5BJournal%5D)">Inheritance of a broad-based form of root-knot nematode resistance in cowpea.</a> Crop Sci. 40, 611-618 (2000).</li>
<li>Hoagland, D. R., Arnon, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+water-culture+method+for+growing+plants+without+soil%5BTitle%5D)+AND+%22Calif.+Agric.+Exp.+Stn.+Circ%22%5BJournal%5D)">The water-culture method for growing plants without soil.</a> Calif. Agric. Exp. Stn. Circ. 347, (1950).</li>
<li>Hussey, R. S., Barker, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+methods+of+collecting+inocula+of+Meloidogyne+spp.%2C+including+a+new+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Dis.+Rep%22%5BJournal%5D)">A comparison of methods of collecting inocula of Meloidogyne spp., including a new technique.</a> Plant Dis. Rep. 57, 1025-1028 (1973).</li>
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<li>Omwega, C. O., Roberts, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inheritance+of+resistance+to+Meloidogyne+spp.+in+common+bean+and+the+genetic+basis+of+its+sensitivity+to+temperature%5BTitle%5D)+AND+%22Theor.+Appl.+Genet%22%5BJournal%5D)">Inheritance of resistance to Meloidogyne spp. in common bean and the genetic basis of its sensitivity to temperature.</a> Theor. Appl. Genet. 83, 720-726 (1992).</li>
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<li>Starr, J. L., Cook, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStarr%2C+JL+%22Resistance+to+Parasitic+Nematodes%22">Resistance to Parasitic Nematodes</a>. Bridge, J. , CABI Publishing. Wallingford. (2002).</li>
</ol>

我们没有需要披露的内容。

成功的线虫筛选有两个关键步骤：制备高侵染性的接种物以及使用处于适当发育阶段的植物。根结线虫卵的孵化率变异较大，通常在5%至50%之间。因此，为了获得最佳的孵化水平和高侵染性的二龄幼虫（J2），必须严格注意卵的提取和孵化操作过程。卵与次氯酸钠（bleach）接触的时间应尽可能短，并且必须将根组织混合物中的次氯酸钠充分冲洗干净。在孵化卵时，含有卵的悬浮液不应完全浸入水中。此外，应避免将卵洒落到下方用于收集孵化幼虫的培养皿中。为防止孵化过程中卵的洒落，切勿直接向Kimwipe纸中加水，以免纸张破损。而应将水直接加入培养皿中。
为获得最佳结果，应使用新孵化的J2幼虫。若孵化率较低且需要更多接种物，可将J2幼虫在15°C下保存较长时间。接种前需将保存的接种物恢复至室温，以恢复线虫活性。然而，即使在15°C条件下，也不应长期保存J2幼虫，因为饥饿状态的J2幼虫侵染效率会降低。
幼嫩的幼苗是根结线虫接种的最佳发育阶段。然而，此阶段需与根系的充分发育相平衡，以提供足够数量的根尖作为二龄幼虫（J2）的侵入位点。保持植物最佳生长条件对于筛选实验也至关重要。应避免过度浇水，特别是生长在种植袋中的植株。当种植袋底部出现积水时，表明已过度浇水，这会促进真菌生长并损害根系健康。
通过这两种实验方法，可进一步评估线虫侵染情况，并计算每株根系的卵数及每克鲜根的卵数。对于番茄实验，需称量单个根系，并按照接种物制备（第3节）所述方法提取卵。在处理大量植物样品时，可使用搅拌器将整个根系组织匀浆以提取卵。卵的数量应至少在三个等分试样中进行计数，并计算每克鲜根组织中的卵数。对于袋式培养实验，将根系从纸质插片上取下，称重后提取卵。

高通量与低通量根结线虫筛选 meloidogyne spp.

High and Low Throughput Screens with Root-knot Nematodes Meloidogyne spp.

根结线虫（Meloidogyne 属）是专性植物寄生线虫，具有极强的多食性，被认为是最重要的植物寄生线虫之一。其感染阶段为在卵内完成一次蜕皮的微观二龄幼虫（J2）。J2从卵中孵化后，在土壤水膜中自由移动，并寻找适宜植物的根尖。侵入植物根部后，它们向维管柱迁移，并利用口针建立取食位点并开始取食。该多细胞取食位点由多个经过核分裂（重复有丝分裂）但未发生胞质分裂的细胞发育而成，形成若干增大的多核细胞，称为“巨型细胞”。邻近的中柱鞘细胞发生分裂并增大，形成典型的根结或根瘤，这是根结线虫感染的典型症状。取食开始后，J2转为定居状态，并经历三次蜕皮发育为成虫。成年雌虫在根表或根下以胶状基质产下150–250粒卵。新孵化的感染性J2由此开始新一轮循环。在26–28°C条件下，根结线虫的生活史周期可在4–6周内完成。
本文介绍了在花盆中种植的植物接种根结线虫的传统方法，以及两种高通量检测方法。第一种高通量方法适用于种子较小的植物，如番茄；第二种方法适用于种子较大的植物，如豇豆和普通菜豆。大粒种子可在几乎无需额外营养补充的条件下支持幼苗较长时间生长。第一种高通量检测方法利用在托盘沙土中培育的幼苗，而第二种方法则在无土壤条件下将植物培养于育苗袋中。育苗袋由一张尺寸为15.5 × 12.5 cm的吸水纸条制成，其顶部折叠形成一个深约2 cm的凹槽，用于放置种子或幼苗，并将该纸条置于透明塑料袋内。这种育苗袋可透过透明表面直接观察线虫侵染症状、根部形成根结及产卵团等情况。两种方法均允许在完成表型鉴定后，将筛选出的植株用于杂交或种子繁殖。使用育苗袋的另一优势在于所需空间较小，因为育苗袋可存放于悬挂在架子上的透明塑料文件夹中。

介绍了两种不同的根结线虫植物筛选方法。所述方法包括以非破坏性方式对线虫进行高通量筛选，从而便于将这些植物用于育种项目。

高通量与低通量根结线虫筛选 Meloidogyne spp.

根结线虫（属名：Meloidogyne）是专性植物寄生虫，具有极强的多食性，被认为是全球最具经济重要性的……

本实验的总体目标是筛选感染根结线虫的植物。首先，在沙质土壤或生长袋中培育健康的幼苗。接着，制备高感染性的根结线虫二龄幼虫接种物。然后对幼苗进行适当的接种和感染。最后评估寄主根系上线虫卵块的发育情况。我们将演示对植物根部（而非线虫）进行高通量和低通量筛选的方法。高通量系统的主要优势在于植物生长所需空间有限，且便于对感染情况进行评估。因此，这些方法可实现可重复且一致的感染效果，使线虫对植物根部的侵染更加均匀，从而更准确地评价植物的寄主状态。通常，初次进行植物根部线虫侵染评估的研究人员可能会遇到困难，主要原因在于未能选用适当的植物发育阶段来进行根部线虫接种。此外，使用已培养数天的感染期幼虫进行实验，这些幼虫通常具有较低的感染能力。演示该实验步骤的将是我的实验室中的胡国添和一名研究生。我将演示在生长袋中进行筛选的实验步骤，用于盆栽试验。将番茄种子种植于装有富含有机质土壤（如Sunshine Mix）的单个花盆中，种子萌发后，将温室温度维持在22至28摄氏度。在发芽后约两周、两片真叶期时，每周用 miracle grow 施肥一次，将单株幼苗移栽至装有无菌沙质土壤的花盆中，土壤成分为 90% 沙子和 10% 有机质。加入 osmo coat 缓释肥料，并在 22 至 28 摄氏度的温室中培养两周。之后继续每周使用 miracle grow 施肥一次。对于高通量筛选，将植物种子直接播种于装有沙质土壤的育苗盘中。用塑料膜覆盖直至种子萌发，并按照前述条件进行培养。种子萌发后，添加Osmocote缓释肥料，并每周用Miracle-Gro营养液施肥一次。在培养皿中铺有多层Kimwipe白纸，将种子置于其中并在25至28摄氏度的培养箱中进行萌发，然后将幼苗转移至独立的种植袋中。或者，将种子放入纸槽中，直接在单个袋内萌发。将袋子放入塑料悬挂式文件夹中，每文件夹一个，并将文件夹整齐排列在架子上，保持垂直状态。将架子放入温度维持在25至28摄氏度、光照16小时、黑暗8小时循环的受控环境室中。播种后约10至14天，每天用反渗透水对育苗袋浇灌一次或两次。当幼苗发育出具有三级根尖的充分根系时，即可进行接种。开始卵提取前，需用热水彻底清洗工作区域及所有工具，以避免污染。将一个水桶放在水槽中用于收集，使溶液流过，并在桶口上方放置一个金属网支撑架。由上至下按孔径递减的顺序叠放三个筛网，使卵滞留在25 µm的筛网中。剪去感病植株的上部并小心弃置。将植株从花盆中取出，放入装满水的塑料桶中浸泡以清洗根部。在流动水下进一步冲洗根部，直至土壤颗粒被完全洗净。然后从感染的番茄根部提取根结线虫卵。首先，用剪刀将根部剪成小段，并去除主根。将一株植物的切碎根段放入一个带盖的大塑料瓶中，加入适量10%次氯酸钠溶液，以浸没根段为宜。盖紧瓶盖，振荡两分钟。打开罐子，将根部倒入上方的筛子中，使用连接在喷雾喷头上软管的水进行冲洗，彻底冲洗至所有漂白剂气味完全消失。同时使用木槌轻敲筛子的侧面，以防止筛孔堵塞。暂停，取下顶层筛子并冲洗残留物。然后取下第二层筛子，用洗瓶的温和水流冲洗，收集细小残留物，其中包括来自最后一层筛子的卵。将残渣移至筛子的一侧。用最少的水将残渣和卵收集到一个干净的烧杯中。将桶中收集的水通过25微米筛网过滤，以收集可能漏过的卵。用清水充分冲洗，并收集到同一个烧杯中。用几层Kim擦拭纸铺垫一个洁净的金属篮，然后将其放入玻璃培养皿中，使金属篮底部与培养皿之间保持一厘米的距离。将提取的线虫卵倒入金属网篮中的滤纸上。加入足够的液体，使金属网篮底部接触水面，但不浸入水中。每天用塑料盖盖住顶部。检查水分蒸发情况，并向培养皿中添加适量水，使篮子底部接触水面。为防止卵在六至八天内每隔一天干燥，将含有二龄幼虫（J2）的水从培养皿收集到烧杯中。若不立即使用，应立即将收集的接种物在室温下通过实验室空气供应或水族箱泵产生的空气进行曝气。随后在磁力搅拌器上以低速搅拌接种物，开始下一步操作。使用三份等量的收集到的线虫。为了计算会计中的J twos数量。滑动或放置培养皿，计算平均值，并确定接种所需的体积。这些是在显微镜下观察到的J twos。通常，每株盆栽植物使用 3000 个 J twos，而育苗盘中生长的植物每株使用 500 个 J twos。在接种植物之前，请确保土壤湿润但不过于潮湿。进行盆栽接种时，在每株番茄根系周围的沙土中打三个孔，深度约为花盆的一半。使用铅笔标记后，用移液器将J twos（J2幼虫）接种到每个植物的三个孔中。随后，将用于高通量筛选的孔板用盖子覆盖。使用经改造的带侧孔密封针头，将其侧壁打孔并粘接到5 mL移液器上。用移液器将J twos滴入土壤中。将植物置于温室中培养6至8周，温度保持在24至27摄氏度。每月施用两次美乐棵（Miracle Grow）肥料。为了评估感染情况，切去植株顶部，小心地将植株从花盆中取出并清洗根部。然后将根部浸入每升含一毫克的溶液中，使卵块染成蓝色。气雾染色15分钟。用清水冲洗根部，并通过计数单个根系上的染色卵块进行评估。可使用带光源的放大镜帮助观察卵块，计数线虫、接种物，并如前所述在磁力搅拌器上搅拌。将袋子从悬挂文件夹中取出，平放在水平表面上。每个袋子接种 1,500 条 J 二幼虫，接种体积为五毫升。掀起袋子的塑料盖，将线虫均匀分布在根系表面。接种后，将袋状物用黑色纸张覆盖以避光，并保持水平放置24小时。之后，将袋状物重新放回生长室水中的悬挂文件夹内。每天需用半浓度霍格兰溶液对植株处理一至两次，持续约三天，直至观察到植株对肥料产生反应为止。通常表现为叶片绿色加深，茎生长更加旺盛。接种后三天，用水保持小袋湿润。接种约30天后，向每个小袋注入约10至20毫升的75毫克/升溶液。气相染色。将小袋保持水平位置，并在染料中浸泡过夜。次日，倒出小袋中的液体，在透射光照明的载物台上通过计数卵块来评估根系。此处放大显示的是被广泛感染的番茄植株根部，其大量卵块被染成蓝色。使用托盘可在较小的生长空间内对数百株植物进行筛选。生长袋还允许快速、高效且非破坏性地评估根部，无需清洗根部即可检测根结线虫感染情况。该方法还能在较小的生长空间内实现对数千株植物的高通量筛选。图中显示的是生长在袋中的豇豆植株根系，接种后可见蓝色染色的卵团。对于线虫的植物测定实验，感染时间非常关键。因此，即使仅延迟感染数天，也可能导致极低的感染水平。观看本视频后，您现在应已充分了解如何用根结线虫感染植物并对其进行评估。请务必注意，被线虫感染的根系需要得到妥善处理。在丢弃根部之前进行高压灭菌，以限制线虫的扩散。此外，使用空中喷洒的草甘膦时需谨慎，高剂量具有致癌性。因此，在处理被该化学物质感染的根部以及配制该化学物质时，都需要佩戴手套。

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免疫学与感染

根结线虫的高和低通量筛选根结线虫。</em

为了研究Xenorhabdus细菌与Steinernema线虫之间的共生关系，研究人员开发了用于监测细菌在线虫体内存在情况及定位的方法。该实验方法可应用于其他系统，其核心步骤是通过基因工程使细菌表达绿色荧光蛋白，并利用荧光显微镜观察透明线虫体内的荧光标记细菌。...

使用荧光显微镜观察线虫中的细菌

在本视频中，我们展示了一种筛选试验，用于评估小分子杀线虫剂对线虫的杀灭效果。若经药物处理后，样品中活动性线虫数量减少，则认为该杀线虫剂有效。...

小分子杀线虫剂筛选实验：一种针对 Ditylenchus dipsaci 的中通量潜在杀线虫剂筛选方法

昆虫病原线虫是一类栖息于土壤中的线形蠕虫，可寄生多种昆虫。本文展示了利用两种技术从土壤中分离这些线虫的采样方法：昆虫诱捕法用于从土壤样品中回收线虫，改良White诱捕器法则用于从受感染的昆虫尸体中回收线虫。...

土壤采样及昆虫病原线虫（Steinernematidae, Heterorhabditidae）的分离

本文介绍了一种对棉花基因型进行快速、非破坏性筛选以鉴定其对肾形线虫抗性的实验方案。该方案包括通过肉眼观察感染线虫的棉花幼苗根部，以确定其感染反应。随后，通过营养繁殖每株植物的营养芽，获得植株用于种子生产。...

筛选棉花基因型对肾形线虫的抗性

本方案概述了一种从野外自然基质中高效提取活体线虫的方法。...

快速分离野生线虫的贝尔曼漏斗法

本实验方案描述了一种可靠且简便的Ditylenchus...

培养与筛选植物寄生线虫 Ditylenchus dipsaci

本文介绍了一种针对松材线虫（Bursaphelenchus...

RNA干扰技术在松材线虫 Bursaphelenchus xylophilus 中的应用

该方案描述了感染过程 Solanum tuberosum 在植物寄生性线虫作用下的根部 体内 温室条件与马铃薯 体外...

in vivo 与 in vitro 条件下马铃薯根部感染植物寄生性线虫以评估诱导的结构变化

我们向农民介绍两种大规模繁殖昆虫病原线虫作为生物杀虫剂的方法。第一种方法采用聚丙烯酰胺凝胶作为线虫培养基质，第二种方法则使用聚合物包被的脱脂棉作为培养基质。两种方法均依赖于 体内...

基于种植者的 在体 内 昆虫病原线虫的繁殖

本方法描述了利用基于红外染料的成像系统，以高灵敏度检测感染小鼠支气管肺泡灌洗（BAL）液中的H1N1病毒。该方法可在96孔或384孔板中进行，所需检测样品体积小于&lt;10...

高通量流感病毒检测方法

了解根结线虫高通量和低通量筛选方法，用于植物病理学和抗病育种研究。本视频演示了利用生长袋和盆栽系统评估植物感染状况的标准化流程，为抗性品种选育提供可重复的技术方案。

高通量与低通量根结线虫筛选 Meloidogyne spp.

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