通过横向流技术检测在血液系统恶性肿瘤患者侵袭性肺曲菌病

该程序的总体目标是展示使用侧向流装置快速检测人血清和 BAL 液中的曲霉菌诊断抗原。这是通过首先将血清或 BAL 样品涂抹到侧向层析装置的释放端口来实现的。第二步是让溶液沿膜迁移。

下一步是通过检查内部控制线来确定测试是否有效。最后一步是通过检查测试线来解释测试结果。最终，侧向层析装置用于检测血清或 BAL 液中曲霉菌诊断抗原的存在。

曲霉菌 LFD 可用作诊断侵袭性肺曲霉菌病的辅助检查。与曲霉菌、半乳糖、马南酶免疫测定、panf、胃底、β 葡聚糖测定和曲霉菌 PCR 检测等现有方法相比，该技术的主要优点是它是一种快速的即时诊断测试，需要最少的实验室设施和培训。尽管 LFD 是为检测曲霉菌属而开发的，但侧向层析技术也可用于检测其他感染性病原体，例如鲸孢菌、镰刀菌和 riser 菌属。

通过结合这些生物体特异性的单克隆抗体，该方法的视觉演示至关重要。由于 LFD 结果的解释需要熟悉检测形式 要从未经处理的血液样本中收集血清，请让血液在 4 摄氏度下凝结 血清和支气管肺泡灌洗液，或者 BAL 液体应在使用前以等分试样储存在零下 20 摄氏度 储存，因为等分试样通过在重复检测期间反复免费储存样品来限制靶抗原降解的可能性，以制备用于检测的血清和 BAL 样品， 在室温下解冻样品，然后在冰上通过涡旋充分混合，然后以 14， 000 RPM 离心 1 分钟对于人样品的常规检测，交替用组织培养基将血清一比一稀释，并将靶抗原与血清免疫复合物解离。用含有 4% EDTA 的 PBS 在沸水浴中加热 3 分钟，将血清稀释 1 至 2，然后以 14， 000.RPM 的速度离心 5 分钟。

人 BAL 液体不需要预处理。BAL 样品已解冻涡旋和离心机是可以直接应用于侧向层析装置的纯样品。为了进行测试，侧向层析装置或 LFD 在室温或 23 摄氏度下储存，可在 12 个月内稳定保存。

要开始检测，请从袋子中取出设备并放置在水平表面上。使用无菌移液器吸头，在几秒钟内将 100 μL 预处理过的血清涂抹到设备的释放端口上。液体应通过毛细管作用沿着观察窗中的亚硝酸纤维素膜迁移。

以同样的方式，将 100 微升纯 BAL 样品涂抹到设备的释放端口上。让检测在室温下运行 15 分钟，此时应记录检测结果。在记录结果之前，测试不应超过 15 分钟。

由于这可能会使结果解释产生偏差，因此延长潜伏期不会增强一周的反应。LFD 由塑料外壳上字母 C 表示的内部对照线和字母 T 表示的测试线组成，无论血清或 BAL 样品中的曲霉菌抗原如何，对照线都应始终出现。这表明如果血清或 BAL 样品中存在曲霉菌抗原，则检测运行正确。

测试线也将在样品应用后的 15 分钟内出现。测试的强度，莱姆反应与血清和 VAL 样品中靶抗原的浓度成正比。该程序最具挑战性的方面是对测试结果的解释。

应在 15 分钟时读取 LFD 结果，并将测试结果与此处显示的代表性示例进行比较，该图所示为 BAL 和血清样品的弱、阳性、中度阳性和强阳性 LFD 结果的代表性示例。血清样本中的任何阳性检测线，无论强度如何，都表明侵袭性肺曲霉病或 IPA 疾病，因为血液中存在循环曲霉菌抗原。无论强度如何，阳性 BAL 反应都表明孢子发芽和肺部潜在致病性 hyphy 的发展。

在没有曲霉菌抗原的情况下，不会出现检测线，结果记录为阴性。下表显示了使用急性髓性白血病的 BAL 液体或根据欧洲癌症研究与治疗组织和国家过敏和传染病研究所研究组的诊断标准诊断的 ML 患者的 LFD 检测结果。此表中包括相应的临床和心理数据，以及针对每位患者的 ASPERIA 特异性 PCR 检测结果。

根据 2002 年 E-O-R-T-C-M-S-G 指南，患者 12、13 和 16 根据宿主因素和临床标准或 GM 阳性被诊断为可能的 IPA。根据修订后的 2008 年 E-O-R-T-C-M-S-G 指南，仅宿主因素和 GM 阳性或单独宿主因素和临床标准并不能表明可能的侵袭性真菌感染，除非分别附有来自临床数据和真菌学的支持证据。根据 2002 年和 2008 年的指南，患者 6 被诊断为可能的 IPA，因为宿主因素、主要和次要临床特征以及 GM 阳性。

最后，请注意，虽然 LFD 检测和 PCR 检测目前均未包含在患者 6 和 12 的 BAL 样本中的 E-O-R-T-C-M-S-G 指南中，但这两种检测与商业 gala manin 检测之间存在很强的一致性，表明存在曲霉菌抗原和核酸遵循此程序。其他方法，如 Pella Glactomannan 酶氨基测定、panf、真菌 β-葡聚糖检测或曲霉菌 PCR 检测，可以同时进行，以确认侵袭性真菌病。不要忘记，使用人类血清和 BAL 液体可能非常危险，设备的作员应始终接种乙型肝炎和肺结核等疾病疫苗。