Name: 微型计算机断层扫描成像制备小鼠冠状动脉血管逆行灌注和灌装 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 16 s
Description: 学习使用逆行灌注技术制备小鼠冠状动脉血管，通过Microfil造影剂填充并结合微型计算机断层扫描成像，实现心血管疾病的精细血管结构可视化研究。

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感谢 Kelly Stevens 博士对本方案的初步试验，感谢 Michael Simons 博士、Kip Hauch 博士以及他们两个实验室的成员提供的总体讨论。
本工作由美国国立卫生研究院（NIH）资助，资助编号为 HL087513 和 P01 HL094374。

1. 开始前的准备工作
<ol> 
 <li>分别用血管扩张缓冲液（PBS 中含 4mg/L 罂粟碱和 1g/L 腺苷）或含 4% 多聚甲醛（PFA）的 PBS 填充压力灌注装置的两侧。</li>
 <li>准备一支 1/2 cc 胰岛素注射器（带固定 29G ½" 针头），吸入 0.1 ml 1:100 肝素溶液（5000U/ml 原液），并将针头弯曲至约 120 度角，针尖斜面朝上。同样操作一支 1 ml 注射器（带 26G ½" 针头），吸入 0.3 ml 饱和 KCl 溶液。</li>
</ol>
2. 暴露心脏并插管主动脉
<ol>
 <li>使用您选择的麻醉剂对小鼠进行麻醉。（我们采用过量的氯胺酮/赛拉嗪混合物：按130 mg/kg氯胺酮和8.8 mg/kg赛拉嗪的剂量，经腹腔注射生理盐水溶液。）</li>
 <li>将麻醉后的小鼠仰卧位固定于解剖托盘上。沿腹中线做切口打开腹腔，并将皮肤向两侧牵拉以暴露器官。将肠管移至一侧，暴露后腔静脉（PVC）区域。</li>
 <li>向后腔静脉（PVC）内注射肝素溶液。拔出针头时，用棉签轻压针孔以防止渗漏，并保持数秒，直至静脉壁形成血凝块并封闭穿刺点。等待2–3分钟，使肝素在小鼠全身循环中充分扩散。</li>
 <li>解剖膈肌和肋骨，以便观察跳动的心脏。通过后腔静脉缓慢注射KCl溶液，直至心脏停止跳动。</li>
 <li>移除膈肌以下的所有器官，并切除小鼠后部组织，保留膈肌前方区域完整。去除膈肌时需小心操作，在靠近膈肌处切断后腔静脉，以便在后续步骤中易于定位靠近心脏的静脉段。</li>
 <li>找到主动脉的切断端。取一段较长的6-0编织丝线缝合线，从主动脉切断端前方数毫米处穿过其下方，并使缝线对折。将此长缝线从中剪断，使主动脉下方保留两段缝线。将套管针插入主动脉的切断端（图1A、B），然后分别用双结扎紧两根缝线，以固定套管针位置，并防止主动脉内产生逆向压力导致液体渗漏。</li>
</ol>
3. 灌注与Microfil注射
<ol>
 <li>将套管针连接至压力灌注装置（图2），并通过将灌注装置加压至100–110 mmHg，开始用血管扩张缓冲液灌注血管（图1C）。通过确认液体从上腔静脉（PVC）流出，仔细检查缓冲液是否已流经冠状动脉。持续灌注至少3分钟，或直至从PVC流出的液体变澄清为止。（在灌注的同时继续进行后续步骤。）</li>
 <li>解剖肋骨并将肋骨固定向后（或移除）以暴露心脏。暴露后，注意避免心脏干燥，可将缓冲液滴加到心脏表面，使用浸有缓冲液的纱布轻轻挤压滴液。清除胸腺以暴露主动脉弓。使用6-0编织丝线结扎主动脉的三个主要分支，以确保液体流向冠状动脉，而非通过这些较大且阻力较低的血管（图1D）。</li>
 <li>用固定剂灌注心脏15分钟，然后用血管扩张缓冲液冲洗至少2分钟。同时，结扎两条前腔静脉，以防止注射Microfil后其从心脏泄漏（图1E）。在上腔静脉（PVC）和主动脉周围预先放置缝线，但在填充完成前不要收紧。</li>
 <li>按照试剂表中的说明配制Microfil，并将其装入1 ml注射器中。在解剖托盘中加入足量的水，以浸没导管（以便在从灌注管路切换至Microfil注射器时防止气泡进入）。断开灌注装置与导管的连接，接上已准备好的Microfil注射器。</li>
 <li>将Microfil注入主动脉，直至冠状动脉充分充填（图1F，图3A）：动脉首先被充填，随后Microfil会“溢出”至毛细血管，使组织呈现Microfil的颜色。当进入静脉侧时，由于Microfil具有疏水性，其最初会以独立小球状形式从小血管中渗出。继续注射Microfil，直至静脉内形成连续的液柱。当血管内Microfil连续不断，并从PVC处持续流出时，表明充填完成。</li>
 <li>充填完成后，迅速收紧先前放置在PVC和主动脉周围的缝线，以防止因心肌组织的弹性作用将Microfil从血管中挤出。</li>
 <li>用湿润的纱布（浸有解剖托盘中的水）覆盖心脏，防止其干燥，并在室温下静置约1小时，直至Microfil完全聚合。在聚合过程中应避免对心脏施加任何外部压力，例如提起或翻转心脏以提前观察心脏背面的充填血管，这可能导致Microfil从某些血管被挤压至心脏更具弹性的区域，从而造成Microfil断裂。</li>
 <li>取出心脏，在4%多聚甲醛（PFA）中后固定过夜（4°C）。随后在70%乙醇中4°C保存。此时心脏血管系统已准备好进行μCT成像。</li>
</ol>
4. 典型结果
能够被Microfil有效灌注的血管，其内部将充满连续且无中断的Microfil（图3A）。冠状血管的充填程度可通过肉眼判断；静脉位于心外膜层18，易于观察（图3A，箭头所示）；动脉则多位于心肌内部18，但也可透过心脏表面清晰可见（图3A，箭头所示）。毛细血管的充填也十分明显，由于心肌组织中毛细血管密度极高，当毛细血管被充填时，心肌组织会呈现出Microfil的颜色（图3A，星号所示）。因此，未能充填的血管网络将因缺乏Microfil而清晰可辨（图3B、C）。
Microfil 中的不连续区域（图 3B 中的星号）经常出现，这是因为 Microfil 具有疏水性，会使其自身收缩，从而导致灌注血管内出现“断裂”。如果通过妥善结扎心脏血管出口来维持血管内的压力，则可减少这些“断裂”。其他不连续区域可能由 Microfil 内的气泡引起。为防止引入空气，在将灌注装置切换至 Microfil 注射器时，应确保套管针完全浸没在水中。如果引入了气泡，通常只需继续进行 Microfil 灌注，直至气泡被推过并排出冠状血管即可将其去除。
如果部分血管床被阻塞，血管网络可能无法完全充盈（图3B，箭头所示）。尽管肝素可抑制血栓形成，但由于灌注操作开始前肝素灌注不充分或其他未知因素，偶尔仍可能发生阻塞。据我们所知，一旦发生阻塞，目前尚无方法可清除阻塞以完成血管充盈。如果充盈过程中使用压力过低，也可能导致充盈不完全，因为Microfil无法被压入所有血管床和毛细血管网络中（图3C）。相反，压力过高则可能导致毛细血管破裂，使Microfil渗漏至周围组织中（图3D）。 
<img src="/files/ftp_upload/3740/3740fig1.jpg" alt="使用血管扩张剂和套管进行心脏灌注的过程；包含连续步骤的示意图。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图1"> 
图1. Microfil灌注方案概览。（A）在膈肌水平附近切断主动脉和下腔静脉（PVC）。（B）使用套管插入升主动脉。（C）通过压力灌注装置（图中未显示）将血管扩张缓冲液灌注至血管中，同时（D）结扎主动脉弓的三个主要分支。（E）将4% PFA灌注至冠状动脉，同时结扎两条前腔静脉。（F）使用注射器将Microfil灌注至冠状动脉，直至观察到其从下腔静脉（PVC）流出。
<img src="/files/ftp_upload/3740/3740fig2.jpg" alt="带有压力表、Y型连接器和橡胶塞的真空过滤装置示意图，用于液体流动。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 2"> 
图 2. 灌注装置。 两个锥形瓶分别装有血管舒张缓冲液或 4% 多聚甲醛（PFA），通过侧臂连接的管道连接并加压。系统通过手动挤压橡胶球进行加压，其中一个锥形瓶连接压力表，以便监测和维持压力。细管穿过橡胶塞并伸入每个锥形瓶的液体中。来自侧臂的压力将液体从每个锥形瓶经由这些细管泵出。细管随后汇入一个止流阀，该阀仅允许来自一个锥形瓶的液体流动。 
<img src="/files/ftp_upload/3740/3740fig3.jpg" alt="鸡胚心脏发育、血管模式分析、显微图像、解剖学研究。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图3"> 
图3. Microfil灌注的心脏样本。（A）灌注良好的血管中Microfil连续完整，几乎无中断（或完全没有），且由于毛细血管已被填充，心肌组织染上了Microfil的颜色（星号所示，与C图比较）。通过心脏表面可清晰观察到动脉（箭头——左前降支动脉）和静脉（箭头头——左冠状静脉）。（B）心脏血管中存在Microfil中断（星号所示）以及部分血管阻塞，导致Microfil未能完全渗透。这些阻塞的血管仍呈红色（箭头），表明灌流过程中血液未被充分冲洗干净。（C）血管灌注不完全的心脏。注意组织未呈现Microfil的黄色，表明Microfil未进入毛细血管。（D）在灌注过程中毛细血管破裂，导致Microfil渗漏至周围组织的心脏（箭头所示）。

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</ol>

小鼠的处理方法经华盛顿大学机构动物护理和使用委员会批准，并遵循 实验动物护理指南 美国国立卫生研究院（NIH出版物编号85-23，1996年修订版）发布的《实验动物的照护与使用指南》。

心脏组织具有极高的代谢需求，因此需要冠状血管持续提供血液中的营养物质和氧气。冠状血管疾病会因血管狭窄和阻塞导致冠状循环功能下降，从而引起组织缺氧和缺血，使患者面临心肌梗死以及心肌不可逆损伤的风险。深入了解这些血管的病变状态十分必要，而研究冠状血管的关键在于对血管系统的可视化。本文介绍一种用于制备小鼠冠状血管以进行 离体 通过向血管系统注入造影剂进行成像。本方案专门设计用于确保所有冠状血管（包括毛细血管）的充分充填，从而实现完整显影。 
为确保所有毛细血管完全充填，必须将填充剂Microfil注入一个部分封闭的系统中，以迫使Microfil进入血管网络中更细小、阻力更高的血管。为在我们的系统中实现这种部分封闭， 体内 灌注系统，我们结扎主动脉弓发出的三条较粗大且阻力较低的动脉。尽管这并不能完全排除所有其他潜在的“渗漏”部位，但其余血管（主要是肋间动脉）管径足够小，由此造成的压力损失不会影响冠状血管系统的充分灌注。当Microfil完全灌注心脏内所有血管后，心肌和血管组织固有的弹性会将部分Microfil从血管中挤压排出。为防止Microfil流失，...

<table><tbody><tr><td>1 ml 注射器</td><td><a href="http://www.bd.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BD Biosciences</a></td><td>BD-309602</td><td></td></tr><tr><td>1/2cc 胰岛素注射器，带永久连接的 29G &amp;frac12;&amp;rsquo; 针头</td><td><a href="http://www.bd.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BD Biosciences</a></td><td>BD-309306</td><td></td></tr><tr><td>2" x 2" 纱布垫</td><td>Med101store.com</td><td>SKU 2208</td><td></td></tr><tr><td>24G &amp;#190;" Angiocath 静脉导管</td><td><a href="http://www.bd.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BD Biosciences</a></td><td>BD-381112</td><td></td></tr><tr><td>26G &amp;frac12;" 规格针头</td><td><a href="http://www.bd.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BD Biosciences</a></td><td>BD-305111</td><td></td></tr><tr><td>腺苷</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma-Aldrich</a></td><td>A9251</td><td>在 PBS 中配制成 1 g/L，用于血管扩张缓冲液（含罂粟碱）</td></tr><tr><td>斜角 Graefe 镊</td><td><a href="http://www.finescience.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Fine Science Tools</a></td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>棉签：6" 非无菌</td><td><a href="http://www.cardinal.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Cardinal Health</a></td><td>C15055-006</td><td></td></tr><tr><td>弯头手术剪</td><td><a href="http://www.finescience.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Fine Science Tools</a></td><td>14085-09</td><td></td></tr><tr><td>解剖显微镜及光源</td><td><a href="http://www.nikon.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Nikon Instruments</a></td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>解剖托盘，11.5 x 7.5 英寸</td><td><a href="http://www.coleparmer.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Cole-Parmer</a></td><td>YO-10915-12</td><td>填充焦油，用于固定小鼠</td></tr><tr><td>精细弯头镊</td><td><a href="http://www.aesculapusa.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Aesculap</a></td><td>FD281R</td><td>需准备两把</td></tr><tr><td>肝素，5000 U/ml 储存液</td><td><a href="http://www.apppharma.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> APP Pharmaceuticals</a></td><td>NDC 63323-047-10</td><td>以水稀释 1:100</td></tr><tr><td>KCl</td><td><a href="http://www.fishersci.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Fisher Scientific</a></td><td>P217</td><td>在 H₂O 中配制成饱和溶液</td></tr><tr><td>氯胺酮（Ketaset），100 mg/ml 储存液</td><td>Fort Dodge Animal Health</td><td>NDC 0856-2013-01</td><td>与赛拉嗪在 0.9% 生理盐水中混合，剂量为 130 mg/kg 体重</td></tr><tr><td>Microfil</td><td><a href="http://www.flowtech-inc.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> FlowTech</a></td><td>MV-122（黄色），也可提供其他颜色选项</td><td>按重量 1:1 混合，并加入 10% 体积的固化剂。注射前现配，并涡旋混匀以确保充分混合</td></tr><tr><td>非无菌缝合线：6-0，编织丝线</td><td><a href="http://www.harvardapparatus.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Harvard Apparatus</a></td><td>723287</td><td></td></tr><tr><td>罂粟碱</td><td><a href="http://www.americanregent.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> American Regent Inc.</a></td><td>NDC 0517-4010-01</td><td>在 PBS 中配制成 4 mg/L，用于血管扩张缓冲液（含腺苷）</td></tr><tr><td>多聚甲醛</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma-Aldrich</a></td><td>P6148</td><td>配制成 4% 溶液</td></tr><tr><td>灌注装置</td><td></td><td></td><td>见图 2</td></tr><tr><td>弹簧剪</td><td><a href="http://www.finescience.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Fine Science Tools</a></td><td>15018-10</td><td></td></tr><tr><td>赛拉嗪（Anased），20 mg/ml 储存液</td><td><a href="http://www.lloydlab.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Lloyd, Inc.</a></td><td>NADA #139-236</td><td>与氯胺酮在 0.9% 生理盐水中混合，剂量为 8.8 mg/kg 体重</td></tr></tbody></table>

小鼠冠状血管逆行灌注与充填作为显微计算机断层扫描成像的制备方法

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

对血管系统的可视化在理解多种疾病状态方面正变得越来越重要。尽管目前已存在多种血管成像技术，但很少有方法能够在涵盖整个血管网络的同时，达到足以显示微小血管的分辨率1,2。此外，许多血管铸型技术会破坏周围组织，从而阻碍对样本的进一步分析3-5。一种可避免上述问题的方法是显微计算机断层扫描（μCT）。μCT成像的分辨率可达&lt;10 微米，能够生成血管网络的三维重建图像，并且可保持组织完整，以便后续分析（如组织学和形态计量学）6-11。然而，通过离体（ex vivo）μCT方法对血管进行成像，需要将血管内填充一种不透射线的化合物。因此，μCT成像所获得的血管结构的准确表征，依赖于血管内填充的可靠性和完整性。在本实验方案中，我们描述了一种用于填充小鼠冠状血管以备进行μCT成像的技术。
目前存在两种主要技术用于灌注冠状血管系统：一种是通过插管逆行灌注主动脉（或主动脉弓的分支）实现的体内灌注方法12-14，另一种是通过离体Langendorff灌注系统实现的体外灌注方法15-17。本文介绍一种专为确保所有血管充分灌注而设计的体内主动脉插管技术。我们使用一种低黏度的放射显影剂Microfil，该化合物可渗透至最细小的血管，从而完整填充毛细血管以及血管网络中的动脉和静脉部分。首先采用加压灌注系统以缓冲液灌注血管，随后灌入Microfil。为确保Microfil能够进入阻力较高的细小血管，我们结扎从主动脉发出的主要大分支，以引导Microfil流入冠状动脉。灌注完成后，为防止心脏组织的弹性回缩将Microfil从部分血管中挤出，需立即结扎可及的主要血管出口。因此，本技术经过优化，可实现灌注剂的完全填充与最大程度的保留，从而能够清晰显示完整的冠状血管网络——包括动脉、毛细血管和静脉。

冠状血管的可视化对于深入理解心血管疾病至关重要。本文介绍一种通过不透射线的硅橡胶（Microfil）灌注小鼠冠状血管的方法，以为微型计算机断层扫描（μCT）成像做好准备。

血管系统的可视化在理解多种疾病状态方面正变得越来越重要。尽管已有多种技术可用于……

本实验的总体目标是用造影剂灌注冠状血管系统，为微型计算机断层扫描（micro CT）成像做好准备。首先，打开小鼠腹腔，插管腹主动脉。随后用血管扩张缓冲液灌注血管系统，接着用AFF固定液进行灌注。随后结扎血管，以引导 PERFUSE eight 并阻断潜在的泄漏点。最后，用放射显影染料填充冠状动脉。可通过肉眼观察心脏或通过显微 CT 成像与分析，来评估冠状血管系统的完全填充情况。尽管该方法可用于观察冠状动脉血管系统、分支模式以及血管阻塞和其他冠状动脉疾病，也可应用于其他器官系统的血管网络，如脑、肾或后肢。该方法的可视化演示至关重要，因为血管结扎步骤较难掌握。如果您不熟悉血管解剖结构，在周围组织中识别并结扎正确的血管也可能具有挑战性。在开始操作前，将压力灌注装置的一侧装入血管扩张剂缓冲液，另一侧装入含4%多聚甲醛的PBS溶液。接着，用一支带有29号半英寸针头的0.5 mL胰岛素注射器吸取0.1毫升浓度为1:100的肝素溶液。然后将针头弯曲至大约120度角，斜面朝上。最后，用一支带有26号半英寸针头的1毫升注射器吸取0.4毫升饱和氯化钾溶液，再将针头按上述方法弯曲成120度角。在对小鼠实施麻醉并将动物腹侧朝上固定于解剖盘后，用乙醇喷洒动物体表，直至其毛发湿润。然后沿中线切开腹腔。牵开皮肤以暴露器官，并将肠管移至一侧，使后腔静脉（PVC）暴露可及。根据需要清除周围的脂肪或结缔组织，将配制好的肝素溶液注入PVC中。当拔出针头时，用带棉头的涂抹棒覆盖针孔，以防止液体渗漏，并将涂抹棒保持在原位数秒钟，直至聚氯乙烯（PVC）管壁凝血并封闭。等待两到三分钟，使肝素在小鼠循环系统中充分扩散后，解剖膈肌和肋骨，以便观察跳动的心脏。然后缓慢将配制好的氯化钾溶液注入下腔静脉，直至心脏停搏。接着，在靠近膈肌水平处剪断下腔静脉，以便在后续步骤中易于定位靠近心脏的一段。随后移除膈肌下方的所有器官，并切除小鼠的后半部分。现在找到主动脉的切断端，在距离切断端前方几毫米处，将一段六零号编织丝线对折后从主动脉下方穿过。剪断这根长的缝线，使主动脉下方保留两根线段。最后，将导管插入主动脉的切断端，并用双结分别扎紧两根缝线，以固定导管位置，并防止主动脉内产生逆向压力时发生泄漏。首先将压力灌注装置连接至导管。然后将灌注装置加压至100至110毫米汞柱的驱动压力，以用血管扩张缓冲液灌注血管。在等待液体变澄清的过程中，通过确认液体正从PVC管中流出，以确保缓冲液已流经冠状动脉。解剖肋骨并将肋骨向外展开，以暴露心脏。暴露后，用浸有缓冲液的纱布轻轻挤出液滴，滴在心脏上，防止其干燥。清除胸腺组织。暴露主动脉弓是该手术过程中最困难的环节。对于初学者而言，定位连接在主动脉弓上的血管可能非常具有挑战性，但一旦理解了血管的解剖结构，操作者就会建立起信心，即使血管被脂肪和其他结缔组织遮挡而无法清晰看见，也能确信其存在。缝合血管需要耐心和稳定的手法，但这一技能随着练习会逐渐变得熟练。然后使用6-0编织丝线结扎三大主动脉分支，以确保液体通过冠状动脉分流，而不是流经这些阻力较低的大血管。接下来，用固定剂灌注心脏15分钟。随后用血管舒张缓冲液冲洗至少2分钟。同时，为防止注射后微填充剂从心脏泄漏，结扎第一根前腔静脉，然后结扎第二根前腔静脉。将缝线环绕 PVC 管和主动脉放置，但在填充前不要收紧缝线。准备好微填充剂并将其装入 1 mL 注射器后，用 F 水填充解剖托盘，使液体覆盖导管。现在，将灌注装置从导管上断开，并连接微型填充注射器。将微型填充剂注入主动脉。填充剂会首先充满动脉，随后渗入毛细血管，使组织呈现出微型填充剂的颜色而变得充血。注意观察微填充剂的疏水性如何导致其从小血管中流出时最初呈现为独立的球状。当微填充剂在血管内连续填充并从聚氯乙烯管（PVC）中流出时，表明填充已完全。填充完成后，应迅速收紧围绕PVC和主动脉的缝线，以防止心肌组织的弹性将微填充剂从血管中挤出。在聚合过程中避免对心脏施加任何外部压力，例如抬起或翻转心脏以试图提前观察心脏背面已填充的血管。然后将一些纱布浸入解剖托盘中的水中，并用该纱布覆盖心脏，以防止其干燥。让心脏在室温下静置约一小时，直至Microfil完全聚合。最后，取出心脏并在4% PFA中于4°C条件下固定过夜。随后将心脏转移至70%乙醇中，并在4°C条件下保存。被Microfil灌注充分的血管将在整个血管系统中呈现连续且无中断的Microfil填充。如第一幅图所示，冠状血管的充盈程度可通过肉眼判断。静脉位于心外膜表面，易于观察，如箭头所示。动脉则位于心肌内部，但也可透过心脏表面观察到，此处由箭头指示。毛细血管充盈也明显可见。请观察本图中由星号标注的心脏毛细血管密集区域。偶尔，阻塞可能阻碍血管床部分区域的充盈。因此，任何未能充盈的血管网络都会因缺乏微灌注而显现出来，如图中箭头所示。微灌注中还可能出现其他断裂，示例以星号标出。如果在微灌注过程中施加的压力过低，也可能导致充盈不完全，因为微灌注材料无法被压入所有毛细血管网络。请注意，组织未呈现出Microfil染料的黄色，表明Microfil未渗入毛细血管。相反，压力过大可能导致毛细血管破裂，使Microfil渗出至周围组织中，如箭头所示。在进行此操作时，务必注意不要过快或过高压力注射Microfil，否则血管会破裂，从而破坏血管铸型。按照微型CT扫描的步骤进行。还可采用其他方法，如免疫组织化学分析，以回答更多问题，并更好地表征血管及周围组织。

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微型计算机断层扫描成像制备小鼠冠状动脉血管逆行灌注和灌装

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高频高分辨率超声心动图：非侵入性重复测量缺血-再灌注小鼠心脏心肌应变、收缩力及二尖瓣反流的首次证据

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使用MicroCT进行对比增强血管成像

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体内 心肌结构、功能、灌注及存活性的定量评估：基于心脏微型计算机断层扫描技术

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利用微计算机断层扫描对β-氨基丙腈诱导的小鼠主动脉瘤与主动脉夹层疾病模型进行定量分析

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大鼠心肌缺血再灌注后冠状动脉血流储备的评估

本文介绍了一种通过离体监测维持压力的动脉灌注压和血流，以及血管树组分（包括毛细血管床和周细胞），在活体小鼠心脏组织中研究冠状微循环的实验方案，其中间隔动脉被插管并加压。...

小鼠心脏毛细血管、小动脉及周细胞的动态测量与成像

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用于基于计算机断层扫描的小鼠后肢血管三维可视化的样本制备

本方案描述了一种改良的胸骨旁长轴切面，用于快速、精确地定位小鼠左前降支动脉。该方法设计更为简便、易于操作，有助于检测心肌缺血-再灌注后冠状动脉血流储备的动态变化。...

小鼠心肌缺血再灌注后冠状动脉血流储备的动态评估

学习使用逆行灌注技术制备小鼠冠状动脉血管，通过Microfil造影剂填充并结合微型计算机断层扫描成像，实现心血管疾病的精细血管结构可视化研究。

小鼠冠状血管逆行灌注与充填作为显微计算机断层扫描成像的制备方法

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