背腹鼠​​类内侧嗅皮层组织的调查矢状窦片的制备

我们描述了大脑切片，保持背腹轴的内侧嗅皮层（MEC）的编制和电生理记录的程序。由于定位的神经编码如下内MEC的背腹侧组织，这些程序协助调查重要的导航和记忆的细胞机制。

以下实验的总体目标是检查内侧进入 RH 皮层中神经元的突触和整合特性的地形组织。这是通过准备在背腹平面定向的内侧进入 RH 皮层的切片来实现的。作为第二步，膜片钳记录是 mento RH 皮层神经元，以研究它们的突触和整合特性。

接下来，确定记录的神经元的位置以评估电生理测量特性的背腹组织。根据星状细胞的输入电阻、膜时间常数和动作电位阈值的测量，获得的结果显示了第二层星状细胞内在特性的地形组织，演示该程序的将是我实验室的研究生 Hugh Pastel。与现有方法（例如水平方向的脑切片）相比，该技术的主要优点是可以准确记录记录的神经元沿皮层背腹轴的位置。

要开始此过程，请从鼠标中取出大脑并立即将其放入冷切中。用碳原冒泡的人工脑脊髓液。三分钟后，用抹刀小心地从切割的 A CSF 中取出大脑。

轻轻地将其直立放在已切割 A CSF 润湿的滤纸上。然后使用剃刀或手术刀尽可能多地切除小脑，而不会影响位于大脑绳端的内侧肠皮层。通过在冠状平面上切片来去除大脑的喙部。

下一个半半截面，大脑位于中线的垂直平面。之后，将半球放回气泡状，切割 CSF 一分半钟，然后再安装。确保颤音刀片的切削刃与水平方向成 20 度角 在安装面上，制作一条平行于颤音刀片的浅强力胶条，大约一个半球的宽度，并且长度足以容纳两个半球首尾相连。

然后通过定位半球，使其内侧表面靠在刮刀上，其背侧范围朝向振动音刀片，将每个半球从切割 CSF 转移到安装表面。轻轻地将半球滑到强力胶条上，并确保每个半球的内表面与颤音底座平行。之后，立即将半球浸入冷切中。

一个 CSF。在整个切片过程中保持温度、CAR 和饱和度。使用振震器，去除矢状面上两个半球的皮质，直到确定每个半球内侧肠皮层的最外侧部分距离外侧表面至少 600 微米。

内侧肠皮层的外侧范围是通过海马腹侧索曲线周围没有厚白色带来识别的。其喙缘和角背索角的非凸形从两个半球切下 400 微米的矢状旁切片，直到到达内侧肠皮层的内侧范围。每次切割后，立即将切片放入保持在 35 摄氏度水浴中的碳水化合物饱和标准 A CSF 中，并孵育约 15 分钟。

15 分钟后，从水浴中取出切片架，并在室温下继续用碳水化合物鼓泡至少 45 分钟。将切片转移到记录室中，该记录室用碳素饱和标准 A-C-S-F-A 35 摄氏度连续鼓泡。接下来，确定内侧输入 RH 皮层内的大致记录区域。

然后切换到高倍率物镜。识别该区域内的活细胞。此时，可以使用常规全细胞膜片钳进行实验，以记录来自已识别神经元的膜电位或膜电流。

神经元身份可以通过记录的神经元的电生理特性以及在细胞内溶液中包含荧光标记来验证。在实验确定记录的神经元沿背腹轴的位置后，切换到低放大倍率物镜。通过在图像中包含记录电极或降低场光阑来标记感兴趣的位置。

为了在重复图像图像中的感兴趣位置、内侧和 RH 皮层区域以及切片的周围区域周围留下一个亮圆圈，以精确定位图像中的记录位置，然后可以将副本叠加在记录位置及其周围环境的初始图像上。可能需要最多三个单独的低放大倍率图像来覆盖从腹侧记录位置到内侧皮层皮层背侧边界的区域。然后可以使用图像处理软件将这些图像拼接在一起。

内侧肠皮层的背侧边界为测量背侧腹侧位置提供了一个方便的标志，但内侧肠皮层的腹侧边界并不明确。这里。DIC 和 NIAL 矢状旁切面分别显示圆形海马体和缺乏进入外侧肠内皮层第一层的旁环状突起。这些是包含内侧肠皮层的典型切片的图像。

导弹染色清楚地揭示了 paras 区域。在相应的图像中，黑色箭头指示的内侧肠内皮层的背缘位于副眼球细胞组的腹侧，该细胞群远远突出到第一层，如红色箭头所示。这是一个矢状面的四倍放大合成图像示例。

背细胞和腹细胞的位置分别由蓝色和绿色实心圆圈表示。黑色箭头标记了内侧皮层的估计背侧边界，并通过白色虚线延伸到深层。白色实线是显示轮廓路径的指南，沿着该路径，从内侧皮层皮层背缘到来自标记的背侧和腹侧星状细胞的腹侧位置细胞记录的距离的像素测量值在此处显示。

这些记录有助于确定细胞的身份并说明内侧的电特性如何进入 r 皮层。第 2 层星状细胞在背侧和腹侧位置不同尝试此程序时。重要的是要记住在准备切片时要格外小心，因为高质量的切片对于高效的电生理记录至关重要。