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快速点护理依诺肝素的抗凝血剂功效的测定全血中
快速点护理依诺肝素的抗凝血剂功效的测定全血中
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JoVE Journal Medicine
Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

快速点护理依诺肝素的抗凝血剂功效的测定全血中

Full Text
14,154 Views
11:17 min
October 12, 2012

DOI: 10.3791/3852-v

Mario A. Inchiosa Jr.1,2, Suryanarayana Pothula2, Keshar Kubal1,2, Vajubhai T. Sanchala2, Iris Navarro2

1Department of Pharmacology,New York Medical College , 2Department of Anesthesiology,New York Medical College

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Summary

示范低分子重量肝素,依诺肝素抑制血液凝固的快速定量测定。消除它的影响力,通过消化与肝素依诺肝素的贡献进行评估。在我们发表的论文中详细介绍较详细地说明检测。

Transcript

作为介绍,我们在这里引用了关于人类受试者低分子肝素依诺肝素血浆水平时间进程的已发表工作。我们今天通过低分子肝素的快速即时检测来展示我们的结果。在这种情况下,实体是依诺肝素。

这张幻灯片中显示的结果描述了长期每天一次接受药物、每天 40 毫克的药物患者的血浆浓度,以及最后一次给药后进一步消失的时间成本可以看出,在给药后大约 4 小时,达到每 ML 0.4 国际单位的峰值浓度, 而该水平在药物的治疗范围内。然而,一个特别有趣的点是给药后 12 小时还剩下多少,因为临床上接受的指南是,在服用低分子肝素后至少应等待 12 小时,在这种情况下是依诺肝素,然后再进行一些特别侵入性的手术,这可能会导致出血的风险。我们感兴趣的是,当时仍然存在一个明显可检测到的量,我们在一些研究中已经关注了这一点,我们将证明这一点。

sender in et 在这项工作中还提出了这样一个事实,即肾功能不全的个体在整个过程中的药物水平要高得多,我们看到 12 小时指南在肾功能不全患者或孕妇或肥胖患者中已知的可能非常不足。我想介绍一下纽约医学院参与这个项目的研究人员。我叫 Mario Osa。

我是这里的药理学教授。我是纽约医学院临床麻醉学副教授 Surya Patula 博士。我叫 Keshar Kal。

我是一名三年级的医学生。这是我们用于这些分析的设备。该设备由 Omicron Corporation 生产。

它可以在线使用或电池供电,因此从这个意义上说,它是真正的护理点。该仪器有两个恒温控制的隔室,我们使用这些隔室对样品进行预孵育,以准备实际测定以及凝血测定本身。该检测的一个主要特点是使用高度纯化的市售肝素酶制剂。

我们从西门子公司购买了它。它以非常稳定的形式提供,易溶于盐水或任何水溶液。在我们的方法中,肝素 ACE 的使用特别有价值,因为它使我们能够获得患者的基线凝血值。

在没有任何肝素、肝素、ACE 影响的情况下,ACE 能够完全降解低分子肝素和普通肝素,但我们在这里特别感兴趣的是低分子肝素,并在没有任何肝素影响的情况下降解为无活性并产生凝血时间值。我们在这里说明的是肝素酶降解低分子量肝素的时间过程,在本例中为依诺肝素。数据绘制为基线切割时间的百分比,因此我们在这里看到的是依诺肝素添加量为 1 抗 10。

每 ML 的国际单位会导致血液凝固时间延长约 50%。然后在 37 摄氏度下与肝素酶孵育不同时间后,我们看到恢复基线凝血时间的时间成本。换句话说,依诺肝素完全降解为无活性。

就抗凝作用而言,我们已经看到一分半钟了。基线凝血时间基本上可以 100% 恢复。在检查了这个时间过程后,我们选择在测量凝血时间之前使用 5 分钟的孵育作为血液的标准预孵育。

用于此即时检测的检测管与我们从制造商处收到的方式相比略有修改。这些管最初包含在活化剂高岭土中,高岭土用于测量活化凝血时间。我们发现,当我们使用没有活化剂的管子时,它确实大大提高了它的灵敏度。

我们将其称为最低活化测定法,因为我们认为现在唯一可能的活化源是管子的玻璃表面,也许还有磁铁。磁力架是自动化分析的重要组成部分。这些管子在管井中旋转,当磁体被密度凝块夹住导致其失去运动时,就会被检测到并发出凝结完成的信号。

我们还研究了使用 omicron 激活的部分血栓形成铂时间盒的测定。该检测以相同的方式进行。该系统中存在的激活略多。

我们的第一步是在小瓶中接收百合肝素酶时对其进行重构。我们向小瓶中加入 0.25 ml 生理盐水,然后等待约 20 秒以完全溶解。接下来,我们将小瓶中的全部内容物吸入结核菌素注射器中,通常在接下来的步骤中回收约 0.2 ml。

将用于预孵育的添加剂添加到含有依诺肝素的新鲜抽取的血液样品中,装在 3 ml 真空管中。第一版代表肝素酶,目前正在混合。接下来,这是向含有依诺肝素但不含肝素酶的试管中加入 0.2 ml 生理盐水,以获得相当的 VO 总体积。

我们使用仪器的内置计时器来倒计时 300 秒。那是 5 分钟的预孵化。预孵育完成后,取出 vacu 管。

最后一步是将 2 ml 预孵育样品转移到我们的最低活化分析管中。这些管子预填充了 100 微升 0.25 摩尔氯化钙以启动凝血。第一根管是用肝素酶预孵育的管。

第二个样品是含有依诺肝素但不含肝素酶的样品。计时器表示自添加氯化钙以来的过期时间,我们现在可以看到第一个样品已完成。这是完成凝血所需的 200 秒的上部小瓶。

不含肝素酶的样品处理时间更长,现在已经结束。这是我们在血液中加标 0.4 国际单位依诺肝素/ml 的典型结果的模拟。也就是说,在这种浓度的依诺肝素下,凝血时间大约缩短了 45 秒,或凝血时间减少了 18%。

可以看出,凝血检测是自动的,并且在检查完成之前,仪器上会保留时间。值得一提的是,我们实际上已经在每毫升 0.1 国际单位的依诺肝素浓度下测试了该测定法。正如我们在引言中指出的,这是依诺肝素的典型治疗剂量后 12 小时可能出现的浓度。

我们也能够可靠地检测出这种浓度。

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医学 68 免疫学 生理学 药理学 低分子量的肝素 低分子量肝素的检测 LMWH的护理点测定 抗因子Xa活性 依诺肝素 肝素酶 全血 化验

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