聚乙烯醇海绵模型植入

本实验的总体目标是利用聚乙烯醇海绵在小鼠体内建立伤口愈合模型。首先通过水化并加载海绵以准备植入，随后将海绵植入小鼠腹部肌肉与皮肤之间形成的皮下袋中。

植入后，可向每块海绵注射相应的处理物质。最后一步是将海绵从小鼠体内取出。最终，可通过切片染色和定量检测来观察伤口愈合过程中的变化与差异。

尽管该方法可为伤口愈合研究提供见解，也可应用于其他研究领域，如肿瘤血管生成、药物递送和移植细胞存活。首先将海绵在0.9%氯化钠水溶液中通过过夜搅拌进行水化。然后将75毫升水化后的海绵悬液在121摄氏度下高压灭菌25分钟。

为对海绵进行灭菌，将高压灭菌后的海绵溶液置于无菌操作台中，然后使用无菌镊子夹取一块海绵，用镊子挤压海绵，并用真空吸头尽可能吸除海绵中的溶液。接着，将挤干的海绵放入组织培养板中，注意在海绵之间留出足够空间，用移液器将处理溶液直接滴加到海绵的中心。然后用移液器吸头轻轻按压海绵，以帮助海绵充分吸收溶液。

将所有海绵加载完毕后，将培养板置于冰上保存，直至将海绵植入小鼠体内。通过夹趾反射试验确认麻醉效果后，先将小鼠以仰卧位固定于鼻罩中。然后使用电动剃毛器，在小鼠肋骨下方腹部区域去除约一英寸见方的毛发。

之后用擦拭物将剪下的毛发清理干净。用碘伏对剃毛区域进行消毒，随后用70%酒精脱碘。接下来，拉紧皮肤。

使用手术刀进行垂直切口，切口长度为待插入海绵直径的1.5至2倍，注意不要切穿体腔。用镊子夹住皮肤边缘。

然后使用梅岑鲍姆剪刀（Metzenbaum scissors）沿切口两侧缓慢分离皮肤与肌肉组织。将分离范围横向扩展至小鼠体宽，并从肋骨区域延伸至后肢。接着，用镊子从两侧夹住第一块海绵，准备将其置入动物体内。

然后将海绵转移至一对直头镊子之间，使其从顶部和底部被夹住。接着用另一对镊子夹起并提起皮肤边缘，缓慢插入海绵，避免接触皮肤或下方肌肉。待所有海绵均插入后，用镊子将切口两侧对合并用缝线穿过皮肤的两层组织。

收紧第一结，力度以刚好闭合皮肤边缘为宜，然后从相反方向再打一个结完成方结，此次需将结拉紧。随后再打两个方结以完成缝合。

放置额外的缝线以关闭整个切口。最后，将动物从麻醉系统中移出并进行监测，直至其恢复意识。小鼠应迅速开始自主活动，并恢复至术前的活动能力。

首先，用所需的溶液填充注射器，并在注射器上安装一个28号针头。然后通过脚趾夹捏确认动物已进入镇静状态后，将针头以45度角穿过足垫中心的皮肤刺入动物体内，以确保针头位于足垫内。随后缓慢将针头垂直抬起。

如果针头位于海绵中，海绵会随针头一同上移。然后缓慢将物质注入海绵，并拔出针头。动物处死后，用镊子夹住皮肤，在目标海绵附近做切口。

最后，小心地将海绵体从周围包膜中分离，避免采集海绵体周围多余的组织。根据将要进行的分析类型，海绵体可在不同条件下保存。对于切片分析，取出的海绵体可包埋于冷冻介质中（例如最佳切割温度化合物），或置于10%福尔马林中固定，随后包埋于石蜡块中进行切片，本实验中这些经H&E染色的海绵体即采用此方法处理。

在三列海绵的染色切片中，如图所示，将海绵沿直径方向切成两半，然后将切面朝下包埋，可获得最佳的切片效果。如图所示，应取海绵切片以确保海绵的整个宽度均呈现在图中。左侧的海绵由于切片边缘组织结构紊乱，表明其包埋或切片方式不正确；而右侧结构完整的海绵则表明其处理方法正确。

观看本视频后，您应能够充分掌握如何制备、植入、注射以及取出聚乙烯醇海绵，以在小鼠中研究伤口愈合过程。