Name: 灭绝培训在彭兰霞窗口无法还原的恐惧 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-24T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: 了解在记忆再巩固窗口期进行消退训练以持久消除条件性恐惧的方法。本研究通过经典恐惧条件反射范式，展示如何更永久地修改恐惧记忆，为焦虑症治疗提供新策略。

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感谢 D. Johnson 和 K. Doelling 在数据收集方面提供的帮助。同时感谢 M.-H. Monfils、J. LeDoux、Y. Niv 和 M. Milad 对实验方案提出的建议。本研究由詹姆斯·S·麦克唐纳基金会以及美国国立卫生研究院（NIH）资助，项目编号 R21 MH072279（E.A.P.），NIH 项目编号 R37 MH038774、P50 MH058911、RO1 MH046516 和 K05 MH067048（J.E.L.），博士后奖学金 NSERC、CIHR 和 AHFMR（M.-H.M.），以及富布赖特奖和布拉瓦特尼克奖（D.S.）提供支持。

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<li>Milad, M. R., Quirk, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurons+in+the+medial+prefrontal+cortex+signal+memory+for+fear+extinction%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neurons in the medial prefrontal cortex signal memory for fear extinction.</a> Nature. 420, 70-74 (2002).</li>
<li>Schiller, D., Levy, I., Niv, Y., LeDoux, J. E., Phelps, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+Fear+to+Safety+and+Back%3A+Reversal+of+Fear+in+the+Human+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">From Fear to Safety and Back: Reversal of Fear in the Human Brain.</a> Journal of Neuroscience. 28, 11517-11525 (2008).</li>
<li>Schiller, D., Delgado, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overlapping+neural+systems+mediating+extinction%2C+reversal+and+regulation+of+fear%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Cognitive+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Overlapping neural systems mediating extinction, reversal and regulation of fear.</a> Trends in Cognitive Neuroscience. 14, 268-2627 (2010).</li>
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未声明任何利益冲突。

本文介绍的实验方案能够通过将中性刺激与厌恶性结果配对，建立一种简单的条件性恐惧反应。一天后，我们通过提示性试验重新激活恐惧记忆，以触发其再巩固过程。在此阶段，我们采用消退训练作为干扰手段。为了验证消退训练是否影响记忆再巩固，我们设置了两组对照。一组在没有进行提示性试验（即未触发再巩固）的情况下接受消退训练，另一组虽接受了提示性试验，但其消退训练发生在再巩固时间窗之外。随后在第二天检测记忆是否自发恢复，或对条件刺激的恐惧反应是否未能恢复。
经典条件反射是一种在过去几十年中被广泛应用于多种物种的经典范式。动物研究表明，恐惧关联的形成及其消退背后的神经机制已得到详细阐述19,20。人类研究已成功采用该范式，以阐明人脑中的神经相关机制21-24。本实验方案是对这一成熟范式的细微改进，因此非常适合用于揭示、表征和调控人类中的记忆再巩固过程。

在再巩固时间窗内进行消退训练可防止恐惧恢复

Extinction Training During the Reconsolidation Window Prevents Recovery of Fear

当恐惧在环境已变得安全后仍持续存在时，便成为一种适应不良的反应。因此，开发一种能够持久防止恐惧重现的方法至关重要。在实验室中，通常采用巴甫洛夫恐惧条件化范式来建立一种可控的、新的恐惧关联。通过将一个无害刺激（条件刺激，CS）与一种厌恶结果（非条件刺激，US）配对，之后仅呈现该刺激即可引发恐惧反应（条件反应，CR）1,2。一旦形成恐惧记忆，可通过消退训练来减弱恐惧，即反复单独呈现条件刺激而不伴随厌恶结果，直至恐惧反应不再表现3。这种抑制性学习会在大脑中建立一个新的、安全的条件刺激表征，该表征与原始的恐惧记忆在表达上相互竞争4。尽管消退训练在抑制恐惧方面有效，但其效果并非永久性的。随着时间推移，恐惧可能自发恢复；暴露于应激环境或回到最初的习得情境也可能导致恐惧重现3,4。
本实验方案通过靶向再巩固时间窗，以更持久的方式调节情绪记忆，从而解决消退效应的暂时性问题。大量证据表明，激活已巩固的记忆会使其进入不稳定状态，在此期间记忆再次容易受到干扰5-9。这一干预机会窗口通常在记忆激活后不久开启，并在约6小时后关闭5,11,16，尽管该时间可能因记忆的强度和形成时间而有所变化15。通过在记忆再巩固过程中将新信息整合至原始记忆痕迹中，可实现对记忆内容的更新10,11。在非人类动物研究中，已有成功案例通过在再巩固时间窗内施加药理学干预来阻断恐惧记忆的表达；然而，大多数所用药物对人类具有毒性，或在人类研究中效果不明确12-14。本方案通过提供一种有效且非侵入性的行为干预手段，克服了上述挑战，适用于人类并具有良好的安全性。
通过在消退前提示恐惧记忆的提取，我们实质上触发了再巩固过程，从而允许新的安全信息（即，消退）纳入，此时恐惧记忆仍易受到干扰。最近一项在大鼠中采用该行为干预的研究已成功利用这些时间参数阻断了恐惧记忆11. 后续在人类中开展的其他研究显示，在已巩固的运动技能被提取后引入新信息，会干扰该技能的稳定性和后续表现16，情节性17，或陈述性18 记忆会导致对原始记忆痕迹的干扰14我们在此概述一种用于阻断人类恐惧恢复的新型实验方案。

条件性恐惧可以通过一种称为消退的抑制过程来减弱，但在时间推移或暴露于压力等条件下可能再次出现。我们的方案提出了一种新颖的预防恐惧恢复的方法，即在记忆再巩固时间窗（被重新激活记忆的重新存储阶段）内进行消退干预。

当危险情境早已解除，恐惧仍持续存在时，便成为一种适应不良的反应。因此，开发一种能够持续预防这种病理性恐惧反应的方法至关重要……

以下实验的总体目标是通过在再巩固时间窗内进行消退训练，阻止恐惧记忆的恢复。该目标通过经典恐惧条件化训练实现，即让受试者学习将一个无害刺激与一种厌恶结果相关联，同时记录生理指标以反映恐惧唤醒程度。第二步中，受试者于次日返回，分别在再巩固时间窗开启期间接受消退训练（使用条件刺激“CS+”作为提示线索），或在该时间窗外接受提示刺激，或不经过再巩固过程而仅接受标准消退训练。接下来，参与者应在第二天返回实验室接受恐惧恢复测试。结果表明，在记忆再巩固时间窗内进行消退训练，与在其他时间进行消退训练的个体相比，恐惧恢复显著减少。与现有方法（如标准消退训练）相比，该技术的主要优势在于：不同于可能引起恐惧复发的消退训练，干扰再巩固过程可能更永久地修改恐惧记忆，从而减少恐惧的恢复。该技术的应用前景可延伸至焦虑症的治疗，为改变恐惧反应提供一种更为持久的方法。随着情况变化。首先，使用蘸有蒸馏水的棉签清洁受试者的指尖，在施加电极前让指尖完全干燥。接着，将高导电性电解质凝胶涂抹于两个电极上。凝胶应略高于SCR电极孔，并且不得含有气泡，因为气泡可能干扰SCR信号。将电极连接至第一和第二指的第一与第二指骨之间，此处皮肤电反应信号更为明显。确保尼龙搭扣带已牢固固定。要求受试者报告其指尖是否感到任何脉动感。为防止干扰皮肤电反应（SCR）信号，若检测到脉动，则应放松绑带。受试者准备就绪后，启动已确认的软件，并为每位受试者保存一个新的文件以记录SCR数据。记录屏幕应与呈现实验程序的计算机分开，并置于受试者视线之外。接着，开始记录约五分钟的皮肤电导样本。通过指导受试者深吸气并屏住呼吸，以确保其产生明显的皮肤电导反应（SCR）。这应会引起明显的皮肤电反应（SCR）升高。在后续操作过程中，应将刺激器盒上的电击触发器拔下。在刺激棒的每个电极上涂抹一滴导电凝胶，然后将其固定在与安装SCR电极的手相对的手腕上。将刺激棒置于内腕部，位于手掌侧最长的肌腱两侧，并用尼龙搭扣带固定。检查确认绑带不过紧。刺激棒放置就位后，告知受试者将接受一系列手动施加的电刺激。手动触发一次单次电击，从低强度开始。在逐渐增加电击强度的过程中，每次以5伏特为增量，持续触发单次电击，直至受试者表示电击感觉不适但不疼痛为止。此时，受试者应出现明显的皮肤电反应（SCR）。记录最终给予的电击强度，并在实验剩余时间内保持该电压水平。准备开始时，协助受试者找到一个舒适的体位，以避免任何移动。双臂应自然放松，手腕置于桌面或舒适座椅的扶手上予以支撑。指导受试者自然呼吸。由于突然的呼吸变化可能干扰皮肤电反应（SCR），需指示受试者始终注视屏幕。告知受试者他们将在屏幕上看到视觉刺激，并可能偶尔接受电击。要求受试者监测其看到的刺激与所受到的电击之间的关系。当受试者准备就绪后，将触发器重新插入刺激器盒，并将确认设置从“关闭”更改为“外部”。将电压调至正确水平，然后

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