Name: 性发展和有性放电禾谷镰刀菌 /em (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: 学习在禾谷镰刀菌中诱导有性发育和子囊壳形成的技术，通过胡萝卜琼脂培养基接种可育菌株，检测孢子释放并评估重组后代表型。该方法可用于筛选突变体和研究真菌遗传学。

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本工作由美国国家科学基金会的资助（MCB-0923794，授予 FT）支持。

1. 子囊壳的制备
<ol>
	<li>在胡萝卜琼脂上进行中心接种10 在直径为6.0 cm的培养皿中，使用一种可育菌株 F. graminearum （推荐 PH-1）。</li>
	<li>将接种后的培养皿置于室温（18–24 °C）并培养至菌丝体到达培养皿外缘（3-5天）。商用家用荧光灯可有效促进子实体形成及孢子释放。</li>
	<li>用无菌牙签轻轻去除气生菌丝。</li>
	<li>用无菌玻璃刮铲或无菌玻璃棒的圆头，将 1.0 ml 2.5 % 吐温 60 水溶液均匀涂布于表面。</li>
	<li>将培养板放回光照条件下。切勿在培养板上加封 Parafilm。</li>
	<li>24小时后，培养皿表面应呈现光泽外观。若菌丝再次出现，需刮除表面并重新涂抹Tween-60溶液。</li>
	<li>在接下来的一周内观察子囊壳的发育情况。可通过轻轻刮取琼脂表面收集子囊壳发育的中间阶段材料，并进行速冻，用于RNA提取。图1).</li>
	<li>到第7天时，成熟的孢子将聚集在培养皿盖上。最初仅能在解剖显微镜下观察到，但到第9天时，其密度已足够高，可肉眼可见。</li>
</ol>
2. 子囊孢子释放实验
<ol>
	<li>在施加Tween溶液后的第6天，使用木制打孔器从琼脂中切下直径1 cm的圆形区域。或者，也可使用解剖刀切除大小相似的片段。将该圆形琼脂块切成两半，每半放置于一块玻璃显微镜载片上。</li>
	<li>调整琼脂块的位置，使其带有子实体的表面垂直于载片表面，并确保孢子沿载片长度方向发射。</li>
	<li>将载片置于湿润 chamber 中，并在光照条件下过夜。次日早晨，孢子将积聚在载片上，肉眼可见（图2）。</li>
	<li>如有需要，可用清水将积聚的孢子冲洗下来并进行定量。</li>
	<li>可通过在实验组装过程中将潜在的子囊孢子释放抑制剂添加至琼脂块的背面，以检测其抑制效果。已有研究利用该技术检测过一些可减少孢子释放的离子通道抑制剂15。</li>
</ol>
3. 重组子代的产生
<ol>
	<li>通过将两种菌株接种于胡萝卜琼脂上开始杂交 F. graminearum （一个 Nit+ 和一个 nit-），将接种点置于培养皿的相对两侧。</li>
	<li>菌丝长满表面后，刮去气生部分，并按上述方法加入Tween-60溶液。用记号笔在培养皿侧面标记菌丝交界处的位置。</li>
	<li>将培养物放回光照条件下培养，直至子囊壳发育，并在两个培养物交界处的子囊壳中开始形成孢子丝。</li>
	<li>在解剖显微镜下，观察两种菌落交界处的子囊壳。使用经灭菌并蘸取无菌水的昆虫针，用针尖轻轻触碰交界处的孢子丝。针尖上的水分应能使孢子丝黏附于针上。</li>
	<li>用带有触手的针尖在其中冲洗 200 μl 将无菌水加入Eppendorf管中以冲洗孢子。</li>
	<li>灼烧针头，再次润湿，然后挑取另一根刚毛。共挑取10至15根刚毛，分别放入盛有水的独立试管中。</li>
	<li>短暂涡旋振荡含有悬浮触手的离心管。</li>
	<li>移除 60 μl 用移液器吸取孢子悬液并接种于MMTS培养基上1 在9 cm的培养皿中，用无菌涂布棒涂布均匀。剩余的孢子悬液可保存于 4 °C 最长可维持一周，必要时可重新接种。</li>
	<li>在室温下孵育（无需避光）3-5天，直至出现非常微小的菌落（图3）。菌落中会出现两种表型。nit- 菌落的菌丝比 Nit+ 菌落稀疏。来自重组子囊果的孢子丝中，两种菌落表型大致以相等比例出现。丢弃仅含单一表型菌落的培养皿。需注意，有时由于其他因子的分离，可能出现两种以上的表型。</li>
	<li>将菌落转移至V8或胡萝卜琼脂上保存。在察氏培养基（Czapek's Dox Agar）上检测菌落（nit- 菌株不能在察氏培养基上生长），并在含氯酸盐的PDA培养基（0.5 M氯酸钾）上检测（Nit+ 菌株不能在含氯酸盐的PDA上生长），以确认正确的表型。观察这些菌落是否具有目标性状。</li>
</ol>
4. 代表性结果
产生子囊壳
目标是获得布满子囊壳且无明显菌丝或孢子的培养表面。培养物表面应类似于黑色天鹅绒（图1）。在添加吐温后24小时，琼脂表面应略带光泽。如果菌丝重新出现，则可能是因为平板刮除不充分，未能诱导子囊壳发育。
子囊孢子释放
在实验中始终使用野生型菌株的多个琼脂块作为对照。如果这些对照未发生弹射，则说明你的子囊果可能过于年轻或过于老化。如果子囊果过于老化，菌落表面会出现大量菌丝，使菌落呈现灰白色。若情况并非如此，则可能是子囊果过于年轻，此时应等待24小时后再次尝试该实验。偶尔会出现菌落弹射效果不佳的情况，此时实验需要重复进行。务必确保在合适的光照条件下进行实验。
重组子代
在两种菌株交界处产生的子囊果中，重组子囊果应占大多数。我们通常从一次杂交中处理10个孢子丝，其中至少应有4-6个为重组型。极少数情况下，某种突变会阻碍菌株交配。如果其中一个亲本具有异常的生长表型，则在MMTS培养基上的菌落中可能出现两种以上的表型。
<img alt="培养皿中的细菌生长模式分析；真菌生长实验结果。" src="/files/ftp_upload/3895/3895fig1.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 1"> 
图 1. 胡萝卜琼脂上子囊壳发育的各个阶段。左侧为添加吐温后 72 小时，注意红色色素以及作为表面黑色颗粒可见的极幼小子囊壳。右侧为 144 小时时，已形成成熟子囊壳。注意两种培养物表面菌丝均几乎完全缺失。
<img alt="在琼脂上观察真菌生长；培养皿实验；孢子形成与扩散分析。" src="/files/ftp_upload/3895/3895fig2.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 2"> 
图 2. 子囊孢子弹射实验。橙色的胡萝卜琼脂块被放置成一定方向，使成熟子囊壳表面强力弹射出的孢子能够聚集在载玻片表面。孢子聚集时间为 15 小时。
<img alt="静态平衡示意图，包含簇状结构；用于沉降分析和颗粒研究的显微镜图像。" src="/files/ftp_upload/3895/3895fig3.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 3"> 
图 3. Nit+ 与 nit- 菌落在选择性 MMTS 培养基上生长差异。nit- 菌落（箭头指示）较小，Nit+ 菌落（箭头指示）生长旺盛。照片拍摄于培养 7 天后。

<ol><li>Bowden, R. L., Leslie, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+recombination+in+Gibberella+zeae%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Sexual recombination in Gibberella zeae.</a> Phytopathology. 89, 182-188 (1999).</li>
<li>Buller, A. H. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBuller%2C+AHR+%22Researches+on+Fungi%22">Researches on Fungi</a>. , Longmans, Green and Co. London, England. (1909).</li>
<li>Cavinder, B., Hamam, A., Lew, R. R., Trail, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mid1%2C+a+mechanosensitive+calcium+ion+channel%2C+affects+growth%2C+development%2C+and+ascospore+discharge+in+the+filamentous+fungus+Gibberella+zeae%5BTitle%5D)+AND+%22Eukaryotic+Cell%22%5BJournal%5D)">Mid1, a mechanosensitive calcium ion channel, affects growth, development, and ascospore discharge in the filamentous fungus Gibberella zeae.</a> Eukaryotic Cell. 10, 832-841 (2011).</li>
<li>Cuomo, C., Güldener, U., Xu, J. R., Trail, F., Turgeon, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Fusarium+graminearum+genome+reveals+a+link+between+localized+polymorphism+and+pathogen+specialization%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The Fusarium graminearum genome reveals a link between localized polymorphism and pathogen specialization.</a> Science. 317, 1400-1402 (2007).</li>
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<li>Hallen, H., Trail, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+L-Type+calcium+ion+channel+Cch1+affects+ascospore+discharge+and+mycelial+growth+in+the+filamentous+fungus+Gibberella+zeae+%28anamorph+Fusarium+graminearum%29%5BTitle%5D)+AND+%22Eukaryotic+Cell%22%5BJournal%5D)">The L-Type calcium ion channel Cch1 affects ascospore discharge and mycelial growth in the filamentous fungus Gibberella zeae (anamorph Fusarium graminearum).</a> Eukaryotic Cell. 7, 415-424 (2008).</li>
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<li>Lee, J., Lee, T., Lee, Y. -W., Yun, S. -H., Turgeon, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shifting+fungal+reproductive+mode+by+manipulation+of+mating+type+genes%3A+obligatory+heterothallism+of+Gibberella+zeae%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Shifting fungal reproductive mode by manipulation of mating type genes: obligatory heterothallism of Gibberella zeae.</a> Molecular Microbiology. 50, 145-152 (2003).</li>
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<li>Min, K., Lee, J., Kim, J. -C., Kim, S. G., Kim, Y. H., Vogel, S., Trail, F., Lee, Y. -W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+gene%2C+ROA%2C+is+required+for+proper+morphogenesis+and+discharge+of+ascospores+in+Gibberella+zeae%5BTitle%5D)+AND+%22Eukaryotic+Cell%22%5BJournal%5D)">A novel gene, ROA, is required for proper morphogenesis and discharge of ascospores in Gibberella zeae.</a> Eukaryotic Cell. 9, 1495-1503 (2010).</li>
<li>Qi, W., Kwon, C., Trail, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microarray+analysis+of+transcript+accumulation+during+perithecium+development+in+Gibberella+zeae+%28anamorph+Fusarium+graminearum%29%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Genetics+and+Genomics%22%5BJournal%5D)">Microarray analysis of transcript accumulation during perithecium development in Gibberella zeae (anamorph Fusarium graminearum).</a> Molecular Genetics and Genomics. , 276-287 (2006).</li>
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<li>Trail, F., Common, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perithecial+development+by+Gibberella+zeae%3A+a+light+microscopy+study%5BTitle%5D)+AND+%22Mycologia%22%5BJournal%5D)">Perithecial development by Gibberella zeae: a light microscopy study.</a> Mycologia. 92, 130-138 (2000).</li>
<li>Trail, F., Xu, H., Loranger, R., Gadoury, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+and+environmental+aspects+of+ascospore+discharge+in+Gibberella+zeae+%28anamorph+Fusarium+graminearum%5BTitle%5D)+AND+%22Mycologica%22%5BJournal%5D)">Physiological and environmental aspects of ascospore discharge in Gibberella zeae (anamorph Fusarium graminearum.</a> Mycologica. 94, 181-189 (2002).</li>
</ol>

我们没有需要披露的内容。

F. graminearum 由于具有高质量注释的基因组（<a href="http://mips.helmholtz-muenchen.de/genre/proj/FGDB/">mips.helmholtz-muenchen.de/genre/proj/FGDB/</a>；4）以及基于 Affymetrix 的基因芯片技术6，特别适用于子实体发育的研究。这有助于鉴定在子囊孢子释放过程中起重要作用的基因7,11,3。本文所介绍的方法可使研究人员针对 F. graminearum 子实体遗传分析中特定的一组发育阶段和功能进行深入研究。这些方法也可轻松适用于其他可在培养条件下诱导产生成熟子实体的相关真菌，并可作为多种不同类型真菌子实体发育研究的标准参考。
在孢子微小且难以观察的物种中，评估孢子弹射表型的能力可能较为困难，例如 F. graminearum。将孢子收集在洁净的载玻片上，既便于进行直观评估，也便于定量分析，因为孢子可从载玻片上冲洗下来并进行定量。某些真菌物种会产生包裹其孢子的黏液，这些孢子无法被冲洗下来，而必须在显微镜下直接计数，因为它们会保留在载玻片上。我们发现 Sclerotinia sclerotiorum 就属于这种情况。

<table><tbody><tr><td>禾谷镰刀菌菌株 PH-1</td><td>真菌遗传资源中心</td><td>FGSC 9075</td><td></td></tr><tr><td>吐温 60</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1629</td><td></td></tr><tr><td>Czapek&amp;rsquo;s Dox 琼脂</td><td>Difco 实验室</td><td>233810</td><td></td></tr><tr><td>氯酸钾</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>255572</td><td></td></tr></tbody></table>

禾谷镰刀菌的有性发育与子囊孢子释放

Sexual Development and Ascospore Discharge in Fusarium graminearum

Fusarium graminearum 已成为研究丝状真菌发育和致病性的模式系统。F. graminearum 在胡萝卜琼脂培养基上最易产生称为子囊壳的果实结构。子囊壳包含多种在子囊壳发育特定阶段形成的组织类型，按出现顺序包括：子囊壳原基（产生子囊性菌丝）、外壁、拟侧丝（在子囊形成前占据子囊壳中心的无性菌丝）、子囊以及子囊内的子囊孢子14。这些组织的发育阶段间隔约24小时，构成了性发育过程中转录组学研究的基础12,8。有关发育过程的更详细描述（包括各阶段的照片），请参见 Hallen et al. (2007)。本文介绍了用于生成和收获同步发育的子囊壳菌垫的方法，以进行基因调控、发育及生理过程的时间序列研究。尽管本方法专为 F. graminearum 设计，但只要能够在培养条件下诱导产果且发育具有一定同步性，这些技术也可适用于其他多种真菌。我们最近已将该方案改进用于研究 F. verticillioides 的有性发育。尽管该物种无法诱导形成同步发育的子囊壳菌垫，必须手工挑选单个子囊壳，但该方法在发育研究中仍表现出良好效果（Sikhakolli 和 Trail，未发表）。
真菌子实体最重要的功能是孢子的传播。在许多子囊菌门（产生子囊的真菌）物种中，由于子囊内膨压的产生，孢子会从子囊中弹射而出，从而将孢子（以及子囊内液）通过子囊顶端的小孔喷射出去2,7。我们对强制性子囊孢子释放的研究已发展出一种“孢子释放测定法”，用于筛选该过程中发生的突变。本文将详细介绍该测定方法的具体步骤。
F. graminearum 是同宗配合的，因此在没有相容性配偶的情况下也能形成子实体。同宗配合的优点在于，无需杂交即可获得特定性状的纯合子后代，这一特性促进了对该物种有性发育的研究14,7。然而，目前已构建出异宗配合的菌株，可用于杂交实验5,9。此外，也可通过同宗配合菌株之间的杂交，获得单个菌株中多个基因的突变体1。该方法通过在同一培养皿中共同接种两种菌株来实现。在菌株相遇的交界区域，大多数子囊壳将为重组产物（前提是任一亲本菌株的突变不会抑制异交）。随着子囊壳的成熟，它们会大量渗出子囊孢子，而非通过强力弹射释放。所产生的孢子渗出物（称为孢子丝）聚集在子囊壳顶端，可轻易采集以分离单个孢子。本文介绍了一种用于识别重组子囊壳及回收重组后代的实验方案。

有性杂交及重组子代的分离是研究丝状真菌Fusarium graminearum的重要研究工具。本文介绍了成功实施这些操作所需的技术。

禾谷镰刀菌已成为研究丝状真菌发育与致病性的模式系统。禾谷镰刀菌最易产生……

本实验的总体目标是学习如何在培养中诱导和调控假原基的形成，并促使子囊孢子释放。首先通过诱导并主动培养以启动有性发育过程；第二步是检测活性孢子的释放，随后产生重组假原基。最后一步是评估子代的表型，以确定是否发生了重组。最终，这些结果可用于筛选有性发育缺陷的突变体，或在同一菌株中产生多个突变。该方法的可视化演示至关重要，因为这些步骤难以用语言准确描述，尽管操作看似简单，但必须精确执行，才能获得最佳的孢子释放效果和稳定的产孢结构形成。首先，在直径六厘米的培养皿中，将胡萝卜琼脂块中心接种一株具有生育能力的禾谷镰刀菌（f. graminearum）。将接种后的培养皿置于室温下，用明亮的标准商用荧光灯照射进行培养。在超净工作台中，让真菌生长三至五天，直至菌丝体到达培养皿的外缘。用无菌牙签轻轻刮取培养物表面，以去除气生菌丝。然后将一毫升表面活性剂涂布于螺旋钻上，并用无菌玻璃棒的弯曲端或球状端在表面涂抹均匀。无需应用perfil。将培养皿重新放回光照条件下。24小时后，培养皿表面应呈现光泽外观。若菌丝重新出现，需再次刮除表面，并重新涂抹Tween 60溶液，再置于光照下处理额外24小时。随后观察麻木样感觉（parathesia）的发展情况，持续一周时间。幼年期的菌丝体在螺旋输送器表面呈现为黑色颗粒，与成熟期的菌丝体相比，其表面菌丝应几乎不存在。到第七天，成熟的孢子会在培养皿盖上聚集；到第九天，孢子密度已高到无需放大即可观察到。为了收获中间阶段的样本，需用手术刀轻轻刮取螺旋接种器表面的孢子团，并将孢子团转移至冻存管中。随后可将冻存管进行速冻处理，用于在施加表面活性剂六天后提取RNA。使用木钻、打孔器或手术刀从钻头中切下一厘米直径的圆形样本。将该圆形样本切成两半，并将两半样本安装在玻璃显微镜载玻片上，使含有子实体的表面与载玻片表面垂直，且孢子沿载玻片长度方向发射。此时，若需使用顶端孢子抑制剂，可将其涂抹于钻头块的背面。该技术可用于筛选孢子释放抑制剂类化学品，以及筛选丧失孢子发射能力的遗传突变体，我们已成功完成了这两项工作。接下来，将载玻片置于一个简单的、光照充足的、室温且加湿的培养环境中，孵育过夜。随着子实体的破裂，孢子将在载玻片上聚集，并于次日早晨清晰可见。现在可将积累的孢子从载玻片上冲洗下来，收集到洁净的培养皿中并进行定量。首先，通过将两种禾谷镰刀菌菌株分别接种到胡萝卜琼脂培养皿的相对两侧，建立遗传杂交。如前所述，培养真菌直至菌丝布满培养皿表面。刮取地上部分，并将T加入60溶液中。在此情况下，标记菌丝相遇的平板位置。将培养物放回光照条件下培养约七天，待原叶体发育并从原叶体与培养物交界处开始形成新生植株。该技术可用于将多个突变整合到一个菌株中。值得注意的是，knit plus 和 knit minus 均可作为选择标记，使其成为非常有用的选择性标记。在解剖显微镜下，观察两个培养物交界处的假根结构。然后找到交界处的眼点。现在将一根灭菌的昆虫针浸入无菌水中，再用针尖触碰两种培养物交界处形成的渗出液。SRIs 应会粘附在针尖的液滴上。然后将针尖浸入装有200微升无菌水的1.5毫升微量离心管中进行冲洗。用火焰灼烧针尖，再次润湿，然后挑取另一株sru。挑取三至五株Siri，分别转移至各自的离心管中。现在短暂涡旋振荡。每管均含有悬浮的Siri。在直径9毫米的培养皿上涂布60微升孢子悬浮液。使用 MMTS 培养基，将平板在室温下避光或光照条件下孵育，并将剩余的孢子悬液在 4°C 下保存，最多可保存一周。3 至 5 天后，平板上会出现非常小的菌落。可在显微镜下观察并记录一种表型。Knit 阴性菌落的 hyphy 比 Knit 阳性菌落更稀疏。丢弃仅有一种表型的平板。重组型 parathesia 的 Siri 中，两种菌落表型大致呈相等比例。保留这些平板。有时由于其他因素的分离，会表现出其他表型，例如菌落表型介于knit阳性与knit阴性之间；出于保存目的，将重组平板上的菌落转移至V八号或胡萝卜螺旋平板上，以便通过检测其他表型继续研究。将菌落接种于Chap X dock螺旋平板以及含氯酸盐的PDA平板上。该菌株生长形成类似黑色天鹅绒的菌苔，无任何菌丝或孢子产生。在施加吐温24小时后，钻头表面出现轻微光泽。如果菌丝重新出现，可能是因为钻头刮取不够充分，未能诱导触诱发麻的产生。将若干块来自野生型菌株并带有子实体的钻头放置于载玻片上，以收集其释放的孢子进行观察。准备了适当的光照以诱导放电。年龄过小或过大的标本通常无法放电。当标本过老时，培养物表面会出现大量菌丝，使其呈现灰白色。如果子实体过于幼嫩，则不会弹射孢子，需要重复实验。24小时后，从一次杂交中收集10个子实体，通常至少有六个根据knit阴性和knit阳性表型的混合特征被判定为重组子。极少数情况下，某种突变会阻止菌株进行交配。如果其中一个亲本具有明显的生长表型，则在MMTS培养基上的菌落中会出现两种以上的表型。在进行该实验操作时，需注意应使用保存良好且未经过长期连续传代的菌种。务必从稳定的冻存菌种开始培养。

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Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

性发展和有性放电禾谷镰刀菌</em

为了研究禾谷镰刀菌子囊孢子的发育过程，本实验拍摄了在无菌条件下收集子囊孢子的操作流程，以期为实验方案的描述提供尽可能详尽的信息。这将有助于提高实验的可重复性，尤其是在进行全基因组表达谱检测时，这一点至关重要。...

玉米赤霉菌子囊孢子的产生与收集用于微阵列实验

种子感染性真菌对谷类作物造成的破坏已促使大量研究致力于深入理解植物与病原体之间的相互作用。为了在实验室条件下研究种子与真菌的相互作用，我们开发了一种可靠的方法，通过籽粒生物测定来定量分析真菌繁殖、生物量及真菌毒素污染情况。...

利用籽粒生物测定法量化真菌定殖、产孢及真菌毒素的产生

我们提供了一种可重复的基本方法，用于裂殖酵母有性生命周期的长期显微观察。通过文中所述的少量调整，该方案可使研究聚焦于生殖过程的不同阶段。...

裂殖酵母有性生命周期的显微观察

在扫描电子显微镜观察的生物样品制备过程中，存在的问题包括细胞塌陷、来自湿润微环境的样品处理以及细胞破坏。本文汇编并详细描述了适用于制备具有挑战性样品（如花分生组织、卵菌囊、真菌（伞菌目））的低成本且相对快速的实验方案。...

扫描电镜（SEM）用于难处理的植物、卵菌和真菌样品的实验方案

本文介绍了一种基于 黄粉虫（Tenebrio...

从土壤样品中分离与筛选昆虫病原真菌及其对害虫的致病力评估

本方案是一种高效且快速的方法，可在短短7天内从大量土壤样本中培养酵母和烟曲霉（Aspergillus...

从土壤中分离可培养的酵母菌和霉菌以研究真菌种群结构

本文详细描述了一种优化的接种方案，该方案利用分离的玉米叶鞘进行可重复的细胞学、生理学和分子水平研究，以分析玉米与真菌植物病原体之间的互作。叶鞘有助于在未固定的组织中实时观察活体植物与真菌之间的细胞相互作用。...

用于真菌性叶部玉米病原菌侵染活细胞成像的离体玉米叶鞘

毛霉菌 Phycomyces blakesleeanus 的有性杂交

表达荧光素酶的乳腺肿瘤细胞被皮下植入小鼠体内，并通过光学成像进行可视化，以在纵向研究中无创地监测肿瘤的生长和发育。...

体内 乳腺肿瘤的生物发光成像：使用 IVIS Spectrum

介绍了在幼虫和成虫期果蝇（Drosophila）中可视化跳动心脏所需的技术。每个发育阶段都需要采用不同的方法。...

在 Drosophila 中观察跳动的心脏

学习在禾谷镰刀菌中诱导有性发育和子囊壳形成的技术，通过胡萝卜琼脂培养基接种可育菌株，检测孢子释放并评估重组后代表型。该方法可用于筛选突变体和研究真菌遗传学。

禾谷镰刀菌的有性发育与子囊孢子释放

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