做自己动手恢复冻存样品的设备不慎掉落到低温储罐

本实验步骤的目的是通过使用一种易于制作的装置，简化从充满液氮的杜瓦罐中取出冻存盒和冻存管样本的操作。首先，从杜瓦罐中取出一个或两个冻存架，以腾出操作空间，随后将该装置垂直插入杜瓦罐内。第二步是用该装置轻轻刮擦杜瓦罐底部。

接下来，沿舱壁将装置竖直拉起。为舀出液氮罐中的冻存盒，最后一步是取回从舱底取出的盒子，并重新安装已移除的冻存架。与倾倒法等现有方法相比，该技术的主要优势在于，它提供了一种简便、安全且快速的替代方案，可保持样本完整性，且仅需单人即可操作。开始组装耐低温装置时，使用钳子将三边扎带的一侧扳直，制成L形强力扎带。

如图所示，强固扎带的尺寸可根据操作者颈部的直径进行选择。应制作两个这样的强固扎带，以便该装置能够取回5.5英寸×5.5英寸的冻存盒。使用皇冠螺栓、螺母垫圈和螺钉，通过强固扎带TST绑带将它们固定，形成冻存铲的底座。

该装置现在应呈现如图所示的外观。接下来，使用带槽金属板，将强固连接T型支架上的槽口与带槽金属板一端的槽口对齐。然后使用Hillman螺母和螺栓将两者固定在一起。

如果开槽板和加固件没有预钻孔，则需钻孔以便安装。如有需要，可通过弯曲开槽板的另一端并用泡沫包裹来制作手柄。为更牢固地握持装置，请务必在水上封闭前移除泡沫。

这种耐低温的DIY取用装置也可改装用于取用冻存管。该改装需将平底部分替换为经过改造的不锈钢滤网，以便从液体中舀取冻存管。开始组装时，首先拧下冠状螺母和螺栓，将坚固的轮胎T型带固定到带槽板上。

然后，在将不锈钢滤网固定到带槽平板之前，用钳子轻轻弯曲滤网的颈部，使底部倾斜成一定角度，形似一个勺子。如果所用滤网带有凸缘，则用钳子将凸缘向下弯曲，以便更方便地操作该装置。

将滤网手柄上的孔与带槽板上的孔对齐，并使用Hillman螺母和螺栓固定滤网。如果滤网未预先钻孔，请钻孔。开始从液氮罐中取出冷冻盒时，务必先戴上低温手套。

然后从液氮罐中取出一到两个冻存架，以便为操作设备腾出空间。接着，使用带有牢固绑带底座的直立式耐低温自制取物装置，轻轻刮擦液氮罐底部，收集掉落到罐底的冻存盒。随后，沿液氮罐内壁将装置竖直提起，将冻存盒从罐中捞出。

请注意，应垂直握住装置并垂直向上拉出，以避免盒子滑回容器内。取用冻存管时，使用配有滤网的冻存管铲，轻轻刮取容器底部，类似于取出冻存盒的操作方式，然后将装置垂直提起，从滤网中取出收集的冻存管。基因表达研究中的一个主要挑战是，RNA 的质量取决于冷冻组织样本和提取后 RNA 的储存条件。

该图显示了样本处理方式对总RNA完整性的影响。来自相同组织来源的总RNA在实验前经历了不同的样本处理方式。完整的总RNA制备结果显示清晰的28S和18S核糖体RNA条带，其中28S核糖体RNA条带的强度约为18S核糖体RNA条带的两倍，表明RNA保持完整。第3道和第4道显示的样本由于从冰箱中频繁短期取出而导致反复部分冻融，出现明显降解，模拟了因需取出掉落的冻存管而多次开闭冻存盒所造成的长期储存过程中的周期性取用情况。

然而，使用 DIY 装置存放在 doer 服务中的样品，由于未发生部分解冻，其第二泳道中的 RNA 保持完整。观看本视频后，您应能够充分掌握如何从充满液氮的 dvar 中取回样品，而无需倾倒液氮。