Name: 病原液泡的分离纯化军团感染吞噬细胞 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: 学习从感染吞噬细胞中分离纯化完整军团菌含液泡的方法。该方案采用不锈钢球匀浆器破碎细胞，结合免疫磁珠分离和密度梯度离心技术，可获得高纯度病原液泡，用于研究军团菌与宿主细胞的相互作用机制。

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本实验室的研究工作得到了马克斯·冯·佩滕科弗研究所、慕尼黑路德维希-马克西米利安大学、德国研究基金会（DFG，HI 1511/3-1）以及德国联邦教育与研究部（BMBF）“医学感染基因组学”计划（0315834C）的支持。

1. LCV 分离的准备工作
<ol>
	<li>在 LCV 分离前四天，将表达 DsRed-Express 的 Legionella pneumophila13,14 从甘油保存菌种接种至含 5 μg/mL 氯霉素（Cam）的 CYE 琼脂平板上进行划线培养。将细菌在 37 °C 条件下培养。</li>
	<li>在感染前一天，将表达 GFP-钙联蛋白的 D. discoideum 或 RAW264.7 小鼠巨噬细胞以 1 × 107 接种于 75 cm2 组织培养瓶中。D. discoideum 使用含 20 μg/mL G418 的 10 mL HL5 培养基，并在 23 °C 条件下培养变形虫。RAW264.7 巨噬细胞使用含 10% 胎牛血清（热灭活）和 1% 谷氨酰胺的 10 mL RPMI 1640 培养基，在 37 °C 及 5% CO2 条件下培养。每次感染和样本至少使用三个 75 cm2 培养瓶（最少 6 × 107 个细胞）。</li>
	<li>用 CYE 平板上的 L. pneumophila 接种过夜培养物。取一支 15 mL 试管，加入 3 mL AYE 培养基和 5 μg/mL Cam，再加入 100 μL 细菌悬液，使 OD600nm 达到 0.1。将过夜培养物置于 37 °C 摇床中振荡培养 21–22 小时。</li>
</ol>
2. LCV 分离
<ol>
	<li>更换 D. discoideum 细胞的培养基以去除抗生素，避免其对后续感染造成干扰。</li>
	<li>测定过夜培养物的 OD 值。细菌在 OD600nm ≥3 时达到最高感染活性，相当于 2 × 109 个细菌/mL。</li>
	<li>通过将约 500 μl 的 L. pneumophila 过夜培养物加入到 10 ml HL5 培养基（D. discoideum）或 10 ml RPMI 1640 培养基（巨噬细胞）中的细胞进行感染，对应的感染复数（MOI）为 50。随后通过在 500 × g 条件下离心 10 分钟使细菌沉降到细胞表面，实现感染同步化。离心后，将 D. discoideum 细胞在 25 °C 培养，RAW264.7 巨噬细胞在 37 °C 和 5% CO2 条件下培养。感染时间 1 小时包含离心步骤。</li>
	<li>感染后移除培养基，并用冰冷的 SorC 缓冲液（用于 D. discoideum）或冰冷的 PBS（用于 RAW264.7 巨噬细胞）洗涤细胞一次，以去除胞外细菌。每瓶中加入 3 mL HS 缓冲液（含蛋白酶抑制剂，Roche），用细胞刮刀收集细胞，并将相应样品汇集至 15 mL 离心管中。</li>
	<li>使用 3 mL 塑料鲁尔锁接头注射器和不锈钢球珠匀浆器进行样品匀浆。确保操作在冰上进行。开始前，先用蒸馏水清洗球珠匀浆器，避免任何去污剂污染，再用冰预冷的 HS 缓冲液冲洗以排除气泡。使用 8 μm 间隙的球珠。</li>
	<li>将前 3 mL 样品吸入注射器并安装至匀浆器上，来回推动样品通过匀浆器九次。之后更换注射器，防止未匀浆材料污染。将匀浆后的样品收集并汇集至 15 mL 离心管中，取 150 μl 样品用于显微镜分析。在处理下一个样品前，拆卸并清洗球珠匀浆器。</li>
	<li>用 2% CS 或 FCS 在 4 °C 条件下于摇床或旋转仪（10–20 rpm）上封闭匀浆液 30 分钟。</li>
	<li>封闭后，加入针对 SidC（稀释比例 1:3000）或其他仅结合 LCV 膜的细菌标志物的亲和纯化一抗。加样前涡旋混匀抗体溶液。在 4 °C 条件下于摇床或旋转仪（10–20 rpm）上孵育 1 小时。</li>
	<li>同时准备 Histodenz 梯度液。每条梯度使用一个 15 mL 离心管，对应一个样品的三个 75 cm2 培养瓶。首先向管中加入 5.75 mL 35% Histodenz 溶液，然后小心地在其上方加入 5.75 mL 10% Histodenz 溶液。之后将离心管水平放置 1 小时。</li>
	<li>匀浆液经封闭剂和一抗孵育后，在 4 °C 条件下以 600 × g 离心 15 分钟，沉淀样品。弃去上清液，将沉淀重悬于 1.5 mL HS 缓冲液中。将样品转移至新的 15 mL 离心管，并取 40 μl 样品留待后续显微镜分析。</li>
	<li>在 4 °C 条件下于摇床上，用 MACS 羊抗兔 IgG 磁珠（稀释比例 1:25）孵育沉淀 30 分钟。同时，将柱子置于 MACS 磁力架上，并用 0.5 mL HS 缓冲液平衡柱子。</li>
	<li>随后将样品加至柱子中。收集 150 μl 穿流液用于后续显微镜分析。用 0.5 mL HS 缓冲液洗涤柱子三次。</li>
	<li>将柱子从磁力架上取下，立即用 0.5 mL HS 缓冲液强力吹打洗脱 LCV。取 20 μl 样品用于显微镜分析。通过免疫磁珠分离纯化步骤，预计每 1 × 107 个感染的 D. discoideum 细胞可获得约 1 × 106 个完整 LCV，洗脱液中 LCV 富集程度约为穿流液的七倍13。</li>
	<li>将 Histodenz 梯度管恢复至垂直位置，并小心地将洗脱液加至顶部。在 4 °C 条件下以 3350 × g 离心 1 小时。</li>
	<li>离心后，使用长玻璃巴氏吸管从离心管底部开始，每次取 1.5 mL 分级收集，共收集八个组分，均从管底取样。在连续的 Histodenz 梯度中无明显可见分层。LCV 的最高产量通常出现在第 4 组分，约为每 1 × 107 个感染的变形虫 2 × 105 个完整 LCV13。少量 LCV 也存在于第 3 和第 5 组分中。因此，每 6 × 107 个感染的 D. discoideum 细胞可获得约 1 × 106 个纯化的完整 LCV13。LCV 的回收可在室温（RT）下进行，且 LCV 在数小时内保持稳定。</li>
</ol>
3. 收集样品的显微镜分析
<ol>
	<li>用多聚-L-赖氨酸包被的盖玻片准备一块24孔平底组织培养板。</li>
	<li>将LCV纯化过程中采集的每个样品以及每份密度梯度组分各150 μl加入24孔板中。每孔加入0.5 mL HS缓冲液以稀释高浓度的Histodenz。随后，将培养板在4 °C下以600 × g离心10分钟。小心吸去上清液，并用4%多聚甲醛（PFA）在室温下固定样品20分钟。固定后用SorC缓冲液洗涤D. discoideum样品两次，用PBS洗涤RAW264.7巨噬细胞样品两次。</li>
	<li>
	<ol class="lalpha">
		<li>将表达GFP-calnexin的D. discoideum在LCV分离不同阶段采集的样品，直接用Vectashield等封片剂封固于载玻片上。</li>
		<li>将RAW264.7巨噬细胞在LCV分离不同阶段采集的样品用封闭液（含1% BSA的PBS）在室温下封闭10分钟。使用抗SidC一抗对LCV进行染色，并在湿盒中室温孵育1小时（亲和纯化的兔抗SidC抗体；按1:1000比例溶于封闭液中）。随后用PBS洗涤样品三次。再加入二抗（如Cy5标记的抗兔抗体；按1:200比例溶于封闭液中），在避光湿盒中室温孵育30分钟。最后用PBS洗涤样品三次，并用Vectashield等封片剂封固于载玻片上。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用配备适当滤光片的荧光显微镜，分析从表达GFP-calnexin的D. discoideum或RAW264.7巨噬细胞中分离得到的LCV的形态、完整性和数量。</li>
</ol>
4. 代表性结果
通过免疫亲和分离和密度梯度离心法纯化LCV的质量和产量可通过荧光显微镜进行监测（图1）。图中展示了从D. discoideum或巨噬细胞中分离LCV过程中所收集样品的概览（图2）。L. pneumophila感染的吞噬细胞匀浆液显示出完整的LCV，但也含有大量细胞碎片和胞外细菌。样品离心沉淀后，显微图像与匀浆液相似，有时密度略高。由于完整的LCV应结合在层析柱上，流穿部分主要包含胞外细菌和细胞碎片。从层析柱洗脱后，洗脱液中含有大量完整的LCV。在我们实验条件下，LCV的纯化效果在D. discoideum中优于巨噬细胞。在D. discoideum中，病原体液泡形态更趋圆形，且分离得到的LCV产量比巨噬细胞高出10倍以上（图3）。在完整的巨噬细胞中，用不同抗体染色的LCV形态则显得更为不规则。
<img alt="显示嗜肺军团菌与Calnexin-GFP相互作用及离心梯度的静态平衡示意图" src="/files/ftp_upload/4118/4118fig1.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图1"> 
图1. LCV分离的示意图。A) 利用针对细菌效应蛋白SidC的亲和纯化抗体，通过免疫磁珠分离法分离LCV，该蛋白特异性定位于LCV膜上。使用偶联了次级MACS微珠的抗体和磁铁，从细胞碎片中分离LCV。B) 免疫磁珠分离后，通过Histodenz密度梯度离心进一步纯化LCV。LCV在第4组分中富集。
<img alt="D. discoideum 和巨噬细胞在蛋白质纯化组分中的显微镜图像：匀浆液、沉淀、流穿液和洗脱液。" src="/files/ftp_upload/4118/4118fig2.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 2"> 
图 2. LCV 纯化过程中收集的样品。图中显示了来自 D. discoideum 或巨噬细胞的匀浆液、沉淀、流穿液和洗脱液样品。D. discoideum 表达 GFP-calnexin 信号（绿色，上图）或经抗 SidC 抗体染色的巨噬细胞（青色，下图）中，含有表达 DsRed-Express（红色）的 L. pneumophila。标尺：10 μm。
<img alt="D. discoideum 和巨噬细胞的显微镜图像，显示用于细胞分析的荧光标记。" src="/files/ftp_upload/4118/4118fig3.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 3"> 
图 3. 从 D. discoideum 或巨噬细胞中纯化的 LCV。样品显示的是经 Histodenz 密度梯度离心后第 4 组分，其中 L. pneumophila 表达 DsRed-Express（红色），(A) 来自表达 GFP-calnexin 信号（绿色）的 D. discoideum，或 (B) 来自经抗 SidC 抗体染色（青色）的巨噬细胞。标尺：10 μm。

<ol><li>Hilbi, H., Hoffmann, C., Harrison, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Legionella+spp.+outdoors%3A+colonization%2C+communication+and+persistence%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Microbiol.+Rep%22%5BJournal%5D)">Legionella spp. outdoors: colonization, communication and persistence.</a> Environ. Microbiol. Rep. 3, 286-296 (2011).</li>
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<li>Shevchuk, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+analysis+of+Legionella-containing+phagosomes+isolated+from+Dictyostelium%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Med.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Proteomic analysis of Legionella-containing phagosomes isolated from Dictyostelium.</a> Int. J. Med. Microbiol. 299, 489-508 (2009).</li>
<li>Brombacher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rab1+guanine+nucleotide+exchange+factor+SidM+is+a+major+phosphatidylinositol+4-phosphate-binding+effector+protein+of+Legionella+pneumophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Rab1 guanine nucleotide exchange factor SidM is a major phosphatidylinositol 4-phosphate-binding effector protein of Legionella pneumophila.</a> J. Biol. Chem. 284, 4846-4856 (2009).</li>
<li>Urwyler, S., Finsel, I., Ragaz, C., Hilbi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Legionella-containing+vacuoles+by+immuno-magnetic+separation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of Legionella-containing vacuoles by immuno-magnetic separation.</a> Curr. Protoc. Cell Biol. Chapter 3, Unit 3(2010).</li>
<li>Urwyler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteome+analysis+of+Legionella+vacuoles+purified+by+magnetic+immunoseparation+reveals+secretory+and+endosomal+GTPases%5BTitle%5D)+AND+%22Traffic%22%5BJournal%5D)">Proteome analysis of Legionella vacuoles purified by magnetic immunoseparation reveals secretory and endosomal GTPases.</a> Traffic. 10, 76-87 (2009).</li>
<li>Mampel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Planktonic+replication+is+essential+for+biofilm+formation+by+Legionella+pneumophila+in+a+complex+medium+under+static+and+dynamic+flow+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Planktonic replication is essential for biofilm formation by Legionella pneumophila in a complex medium under static and dynamic flow conditions.</a> Appl. Environ. Microbiol. 72, 2885-2895 (2006).</li>
</ol>

未声明任何利益冲突。

与先前发表的方法相比，本方案基于两个步骤：首先通过免疫磁性分离法分离LCVs，然后通过密度梯度离心进一步纯化LCVs。当使用荧光标记的细菌与表达GFP的细胞或抗体染色时，可通过荧光显微镜方便地追踪LCV的分离过程。此处描述的方案是一种简单直接的方法，能够高效富集高纯度的LCVs。重要的是，在裂解缓冲液中添加蛋白酶抑制剂对RAW264.7巨噬细胞是必需的，但对D. discoideum 则为可选项13。
原则上，只要存在一种特异性且能够选择性定位的标记物用于分离步骤，该方案便可适用于其他病原体或宿主细胞。理想情况下，这种特异标记物应来源于细菌，可被转运至液泡膜并选择性地定位于此。若以宿主细胞标记物为靶点，则可能导致病原体液泡与其他宿主细胞区室共同被非特异性地纯化，从而产生不良结果。
一旦鉴定出病原体液泡的特异性标记物，就需要制备相应的多克隆或单克隆抗体。针对每一种一抗，均需优化其浓度和封闭试剂，因为除胎牛血清（FCS）以外的封闭试剂可能更为合适（例如牛血清白蛋白（BS...

从legionella感染的吞噬细胞中纯化病原体液泡

Purification of Pathogen Vacuoles from Legionella-infected Phagocytes

机会性病原体Legionella pneumophila是一种抗阿米巴的细菌，也可在肺泡巨噬细胞中增殖，从而引起严重的肺炎——“军团病”1。在原生动物和哺乳动物的吞噬细胞中，L. pneumophila采用一种保守的机制形成特定的、允许复制的区室，即“含Legionella的液泡”（LCV）。LCV的形成依赖于细菌的Icm/Dot IV型分泌系统（T4SS），该系统可将多达275种“效应蛋白”转运至宿主细胞内。这些效应蛋白可调控宿主蛋白和脂质，并与分泌性、内体性和线粒体细胞器相互作用2-4。
LCV的形成是一个复杂、稳健且具有冗余性的过程，难以通过还原论的方式加以理解。需要采用整合性方法来全面认识LCV的形成机制，包括对病原体-宿主因子相互作用及其时空动态进行全局分析。作为实现这一目标的第一步，首先对完整的LCV进行纯化，随后通过蛋白质组学和脂质组学进行分析。
通过液相色谱或二维凝胶电泳联合质谱技术进行的蛋白质组学分析，已用于研究含病原体液泡的组成与形成。这些研究中分离的液泡来源于社会性土壤阿米巴原虫Dictyostelium discoideum或哺乳动物吞噬细胞，其中含有Leishmania5、Listeria6、Mycobacterium7、Rhodococcus8、Salmonella9或Legionella spp.10。然而，这些研究所采用的纯化方案耗时且繁琐，例如需要电子显微镜来分析液泡的形态、完整性和纯度。此外，这些方案并未利用病原体液泡的特异性特征进行富集。
本文所述方法通过使用表达荧光LCV标记物的D. discoideum，并靶向细菌效应蛋白SidC，克服了上述局限。SidC可通过结合磷脂酰肌醇4-磷酸（PtdIns(4)P）特异性锚定于LCV膜上3,11。首先利用针对SidC的亲和纯化的一抗及偶联磁珠的二抗，通过免疫磁珠分离富集LCV；随后再通过经典的Histodenz密度梯度离心进行进一步纯化12,13（图1）。
对分离的 D. discoideum LCV 进行的蛋白质组学研究揭示了超过 560 种宿主细胞蛋白，包括与吞噬性囊泡、线粒体、内质网和高尔基体相关的蛋白，以及若干此前未被发现参与 LCV 形成的 GTP 酶13。通过本文所述方案富集和纯化的 LCV 可进一步用于显微镜分析（免疫荧光、电子显微镜）、生化方法（Western 印迹）以及蛋白质组学或脂质组学研究。

本文介绍了一种从变形虫和巨噬细胞中分离和纯化完整含有Legionella的液泡（LCVs）的方法。该两步法包括：首先利用针对细菌性LCV标志物的抗体通过免疫磁性分离富集LCVs，随后通过密度梯度离心进一步纯化。

从Legionella感染的吞噬细胞中纯化病原体液泡

机会性病原体嗜肺军团菌是一种抗变形虫的细菌，也可在肺泡巨噬细胞中复制，从而引起严重的……

以下实验的总体目标是从感染的吞噬细胞中分离出含有军团菌的完整VAE或LCD。首先，使用不锈钢球匀浆器对感染的吞噬细胞进行匀浆处理。在第二步中，将匀浆液与一种特异性靶向定位于LCV膜上的细菌效应蛋白的一抗孵育，随后与偶联磁珠的二抗孵育。接下来，利用磁场保留抗体修饰的液晶微珠（lc vs.），随后进行洗涤和洗脱。最终，可通过密度梯度离心进一步纯化磁性富集的液晶微珠（LCDs）。该技术相较于现有方法的主要优势在于，可利用感染后寄生虫特定区室的分子特征，从而纯化出完整的病原菌。在分离LCV前四天，将产DS红色荧光的嗜肺军团菌从甘油保存液中划线接种至含氯霉素（5微克/毫升）的活性炭酵母提取物琼脂平板上。于37摄氏度培养细菌，感染前一天使用。CDA培养基中培养表达Calnexin-GFP的Dium Disco Dium至75平方厘米组织培养瓶中，每瓶加入10毫升HL-5培养基及G418，在23摄氏度下培养。实验前一天，接种约100微升嗜肺军团菌悬液至含3毫升YE培养基和5微克/毫升氯霉素的15毫升试管中。为了获得600纳米波长下的光密度值为0.1，应在开始分离前将过夜培养物置于37摄氏度的旋转摇床上孵育21至22小时。首先，更换去分化qadium细胞的培养基以去除抗生素。现在测定1比10稀释的嗜肺军团菌过夜培养物的光密度，其值应约为0.3。然后将约 500 微升的嗜肺军团菌悬液转移至每个烧瓶中，以感染盘基网柄菌细胞。通过在 500 × g 和 25 °C 条件下离心 10 分钟，使细菌沉降到细胞上，从而同步感染过程，随后在 25 °C 下孵育盘基网柄菌细胞 1 小时。感染完成后。移除培养基，并用冰冻的 C 源缓冲液洗涤一次阿米巴细胞。为去除任何胞外细菌，向每个培养瓶中加入 3 毫升含有蛋白酶抑制剂的 HS 缓冲液，然后使用细胞刮刀收集细胞。感染细胞的匀浆是该实验步骤中最关键的部分。成功取决于一个极为洁净的不锈钢球状匀浆器、匀浆器正确的排除尺寸、奇数次研磨次数以及施加压力的大小。将相应样品在15毫升试管中混合后，先用蒸馏水清洗带有8微米间隙小球的不锈钢球状匀浆器，然后用预冷的hs缓冲液冲洗匀浆器。接着，用3毫升塑料LOR锁扣注射器吸取第一份3毫升的细胞溶液，并将该注射器安装到匀浆器上。将样品在匀浆器中来回推压九次，然后将匀浆后的样品收集到一个新的15毫升离心管中。弃去使用过的注射器，安装一支新的注射器。将全部匀浆样品混合后，取150 µL Elisa缓冲液转移至eppendorf管中，用于后续分析。然后在摇床上将匀浆物置于冰上，用 2% 小牛血清封闭 30 分钟。封闭后进行涡旋振荡，加入针对仅与 LCV 膜结合的任何细菌标志物的一抗，再在摇床上冰浴孵育一小时。在此期间，向一支新的 15 毫升锥形管中加入 5.75 毫升 35% histo den 溶液。小心地覆盖 5.7

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Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

病原液泡的分离纯化<em&gt;军团</em&gt;感染吞噬细胞

来源：Jung, A. L. 等.，《嗜肺军团菌外膜囊泡：分离及其对巨噬细胞促炎潜力的分析》。视频实验杂志（2017）本视频展示了用嗜肺军团菌（Legionella pneumophila）外膜囊泡（OMVs）对巨噬细胞进行预处理，以研究其对细菌复制的影响。OMVs通过改变宿主免疫信号通路，使巨噬细胞更易于被感染。与未处理细胞相比，处理细胞中更高的菌落计数表明，OMVs可促进嗜肺军团菌（L.

检测经外膜囊泡预处理的巨噬细胞中 Legionella pneumophila 的复制

来源： Jung, A. L., 等. Legionella pneumophila 外膜囊泡：分离及其对巨噬细胞促炎潜能的分析。J. Vis. Exp. (2017)本视频演示了利用连续离心、无菌过滤和超速离心从Legionella...

基于超速离心的分离方法 嗜肺军团菌 外膜囊泡

来源：Sigal, N., 等. 从巨噬细胞内增殖的单核细胞增生李斯特菌中提取RNA。 J. Vis. Exp.

从感染的宿主细胞中分离胞内病原菌

来源： Pett, N., 等T4 噬菌体和 E. coli 小鼠肠道中的相互作用：研究宿主-噬菌体动态的典型模型 体内. 视频实验杂志...

从细菌裂解液中纯化噬菌体

该技术提供了一种方法，用于收获、标准化并定量在感染哺乳动物细胞之前，经天然原生动物宿主细胞预培养的细菌病原体的胞内生长情况。该方法可进行修改，以适用于多种不同的宿主细胞作为启动阶段的培养系统，以及不同类型的靶细胞。...

可操控的哺乳动物细胞感染实验：原虫预处理的细菌感染方法

最近，蜡螟 Galleria mellonella 的幼虫已被确立为研究 Legionella pneumophila 感染的 in vivo 模型。本文中，我们展示了利用该幼虫模型表征 Legionella...

使用Galleria mellonella作为模式生物研究Legionella pneumophila感染

我们采用差异性皂苷透化法，对骨髓来源巨噬细胞中的胞质和液泡内Salmonella...

细胞质与液泡的定量分析 沙门氏菌 通过差异性通透处理在原代巨噬细胞中进行

本文介绍了从液体培养物中纯化嗜肺军团菌（Legionella pneumophila，L.

Legionella pneumophila 外膜囊泡：从巨噬细胞中分离及其促炎潜力的分析

本文介绍一种简单快速的方法，通过用生物素和链霉亲和素包被细菌，从巨噬细胞中分离含有Salmonella...

从巨噬细胞中分离含有Salmonella typhimurium的吞噬体

细菌细胞成像是一种新兴的系统生物学方法，旨在解析调控大型大分子机器功能的静态与动态过程。本文通过整合定量活细胞成像与冷冻电子断层扫描技术，用于研究Legionella pneumophila...

应用活细胞成像与冷冻电子断层扫描技术解析时空动态特征的 嗜肺军团菌 Dot/Icm 分泌系统

学习从感染吞噬细胞中分离纯化完整军团菌含液泡的方法。该方案采用不锈钢球匀浆器破碎细胞，结合免疫磁珠分离和密度梯度离心技术，可获得高纯度病原液泡，用于研究军团菌与宿主细胞的相互作用机制。

从Legionella感染的吞噬细胞中纯化病原体液泡

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