使用INTERCEPT血液系统制备并灭活双剂量血沉棕黄层血小板制品中的病原体

在本视频中，将从七个 Buffy coat 混合池中制备双剂量血小板浓缩物，并随后使用 intercept 进行处理。观看本视频后，您应能够充分掌握如何制备经病原体灭活的双剂量血小板浓缩物。首先，我们将展示一个示意图概览，然后进行实际操作演示。

将捐献的全血前七单位进行离心分离，获得七个符合体积和红细胞压积目标的白膜层单位。将这些白膜层连接并汇集后再次离心，随后将血小板悬液与残留的红细胞分离，制备双剂量血小板浓缩物，用于病原体和白细胞的灭活。

采用拦截系统处理双剂量血小板浓缩物，该系统可交联核酸。最终，此操作可获得两个治疗剂量的血小板，在储存七天后仍具有可接受的体外质量，其评估指标包括pH值、葡萄糖、乳酸、PO₂和PCO₂，以及洋葱多鲁。我所在血站的一名技术员将演示该操作流程，以及我们将描述的处理要求。

首先，确保双剂量血小板浓缩物符合中间处理规格：体积为 300 至 420 毫升，血小板剂量为 2.5 至 7 × 10¹¹，红细胞含量少于 4 × 10⁶ 个/毫升。本操作步骤需使用在 450 毫升分层采集套装中采集的 7 个单位全血。

将血袋放入离心杯中，按照制造商的说明，在室温下以 4,880 RCF 的条件进行高速离心，离心 11 分钟，刹车设定为 B5。离心后，血液将分为三层：红细胞层、白膜层和血浆层。将血浆挤入上方的卫星袋，红细胞挤入下方的卫星袋，保留约 48 毫升、血细胞比容为 37% 的白膜层于采集容器中。

将7个血沉棕黄层置于血小板振荡器上，在室温下无菌连接，并加入300毫升SSP Plus血小板添加液，静置过夜。采用串联配置，将添加液置于上方，夹闭添加液与第一个血沉棕黄层之间的管路（如图所示）。打开血沉棕黄层各单元之间的焊封，使其液体流入最后一个血沉棕黄层容器中。

接下来，打开添加剂溶液与第一个血沉棕黄层之间的夹子和焊点，使约三分之一的添加剂溶液（约100毫升）依次流经每个血沉棕黄层容器进行冲洗，然后关闭夹子；重复洗涤两次，每次均使用约100毫升的添加剂溶液。将汇集的血沉棕黄层容器与已排空的容器断开。此时血沉棕黄层汇集后的总体积（包括添加剂溶液）应约为600毫升。

将混合的血沉棕黄层置于室温下振荡一小时。然后将带有集成白细胞减除滤器的血小板储存容器连接至含有混合血沉棕黄层的血袋。将混合的血沉棕黄层和血小板储存容器放入离心机，以462 RCF离心九分钟二十秒。

离心后，将血小板悬液通过 Luca 减量滤器转移至血小板保存容器中。所得为双剂量血小板浓缩物，体积为 420 毫升，含有约 7 × 10¹¹ 个血小板，可使用 Intercept 病原体灭活系统进行病原体灭活处理。该双剂量血小板浓缩物采用 Intercept 处理套装进行处理，套装包括抗凝容器、照射容器以及两个储存容器。

将血小板悬液容器连接到截留处理装置的Amin容器上，然后悬挂血小板。折断Amin容器底部的套管，使溶液流入光照容器中。

然后折断 Amin 容器上端的套管，使血小板流入 Amin 容器，再进入透光容器中。轻轻混匀血小板与 amotosin 混合液。轻压透光容器，排出其中的空气。

将照明装置与阿马托及容器之间的管路进行密封，确保从照明容器中伸出的管路不超过四厘米。移除并丢弃空容器。将处理套装放入照明仪中，照明容器置于左侧的大隔间内，整理器置于右侧较小的隔间内。

扫描捐赠编号、产品代码并进行处理。将批号输入照明仪。

关闭金属盖和抽屉。按下启动按钮开始照射。照射仪可向 illumination 容器中的血小板氨基混合物提供可控剂量的 UVA 光。

氨基化合物插入病原体的核酸碱基对之间，这些病原体可能存在于血小板制品中。光照后，会形成永久性交联，使DNA或RNA紧密结合，从而阻止病原体复制，避免受血者因输注血液制品而发生感染。光照完成后，移除处理装置。

接下来，从整理架上取下容器，悬挂血小板及处理装置。折断照射容器出口处的导管，使血小板流入 CAD 容器中。CAD 容器内含有一片载有固定化大孔聚苯乙烯微珠的晶片，可降低血液制品中残留胺的含量。

注意不要弯曲 CAD 晶圆。将 CAD 容器中的空气排入照明容器中。在靠近 CAD 容器入口端口处封闭管路。

移除并丢弃空的照明容器。将带有已连接储存容器的 CAD 容器置于血小板振荡仪上，振荡 6 至 16 小时。此过程可使残留的 amlin 降低至浓度小于或等于 2 µM。

经 CAD 处理后，将血小板单位从振荡器上取下，悬挂血小板袋，折断 CAD 容器出口处的导管，使血小板流入两个储存容器中。接着，挤出储存容器中的空气。在 Y 型接头上方封住导管，并移除 CAD 容器。

结果是获得两份经过病原体灭活处理的血小板浓缩物，用于评估体外血小板功能。通过截距法测定血小板浓缩物的剂量、pH、PO₂、乳酸生成量和葡萄糖消耗量。血小板浓缩物在储存期间持续检测至第7天。

该图显示了在拦截处理前双剂量血小板浓缩液的平均起始血小板剂量，以及储存第7天内各处理后分装产品的平均血小板剂量。由此可见，储存期间血小板损失约为9%。该减少程度与常规血小板储存期间预期的血小板损失无差异。根据欧洲要求，血小板的pH值在有效期内结束时必须保持在6.4以上。

在处理过程中，血小板浓缩物的pH值会因血小板浓度、体积以及血小板储存容器的气体通透性而略有下降。本图显示了分装后的血小板制品在七天储存期间的pH值变化，pH值保持稳定，并符合处理要求。储存期间血小板应持续进行有氧代谢，这是血小板在输注给患者后体内功能活性的重要指标。

血小板的 O₂ 消耗和 CO₂ 产生表明，在储存期间，PL 24 10 容器中的血小板在七天内持续进行呼吸作用。同样，储存的血小板中无氧代谢也应持续进行。因此，葡萄糖消耗和乳酸产生也是血小板在输注后功能状态的指标。

这两个图显示了储存七天期间乳酸和葡萄糖水平的变化。血小板的葡萄糖消耗与乳酸生成彼此一致。在七天的储存期间，有五个单位的葡萄糖水平低于1.11毫摩尔/升，此值为葡萄糖检测的下限。

Buffy 层制备与合并验证所制备的血小板浓缩物符合病原体灭活处理的输入标准，具体包括体积、血小板计数、血浆比例以及红细胞污染程度。最终制品在储存七天期间内均满足验证标准，包括血小板剂量和 pH 值。与传统的 Buffy 层制备方法（仅制备单剂量血小板浓缩物）相比，该技术的主要优势在于：最大化提升了血液采集后成分的产出率，通过采用双剂量技术降低运营成本，并通过灭活经输血传播的病原体提高患者安全性。