使用INTERCEPT血液系统制备并灭活双剂量血沉棕黄层血小板制品中的病原体

在本视频中，将从七个白膜层混合物制备双剂量血小板浓缩物，并随后用拦截法进行处理。观看本视频后，您应能充分理解如何制备经病原体灭活的双剂量血小板浓缩物。首先，我们提供一个示意图概览，然后进行演示。

将捐献的全血前七单位进行离心分离，获得符合体积和红细胞比容目标的七个白膜层单位。将白膜层连接并汇集后再次离心，随后将血小板悬液与残留的红细胞分离，制备双剂量血小板浓缩液，用于病原体和白细胞的灭活。

采用Intercept系统处理双剂量血小板浓缩物，该系统可交联核酸。最终，此方法可在七天储存期内获得两个具有可接受体外质量的治疗剂量血小板，其质量评估依据包括pH、葡萄糖、乳酸、PO₂、PCO₂以及shallot doru。我所在血库的一名技术人员将演示该操作流程，以及我们将要描述的处理要求。

首先，确保双剂量血小板浓缩物符合截留处理规格：体积为 300 至 420 毫升，血小板剂量为 2.5 至 7 × 10¹¹，红细胞少于 4 × 10⁶/毫升。本操作程序从使用 450 毫升顶层-底层采血套装采集的 7 个单位全血开始。

将血袋放入离心杯中，按照制造商的说明，在室温下以4,880 RCF离心11分钟，刹车设置为B5。离心后，血液将分为三层：红细胞层、白膜层和血浆层。将血浆挤入上层卫星袋，红细胞挤入下层卫星袋，保留约48毫升、血细胞比容为37%的白膜层于采集容器中。

将7个血沉棕黄层置于室温下的血小板震荡器上，连接300毫升SSP plus血小板添加液，无菌连接并过夜。以“列车”式连接，将添加液置于最上方，夹住添加液与第一个血沉棕黄层之间的管路，如图所示。打开各血沉棕黄层单位之间的焊接点，使其流入最后一个血沉棕黄层容器中。

接着，打开加样溶液与第一个富血小板层之间的夹子及焊点，使约三分之一的加样溶液（约100毫升）依次流过每个富血小板层容器，然后关闭夹子；重复此洗涤步骤两次，每次使用约100毫升的加样溶液。将汇集后的富血小板层容器与空容器断开。富血小板层汇集体积（包括加样溶液）应约为600毫升。

将混合的血沉棕黄层置于室温下振荡一小时。然后将带有集成白细胞减除过滤器的血小板储存容器连接至含有混合血沉棕黄层的血袋。将混合的血沉棕黄层和血小板储存容器放入离心机，以462 RCF离心九分钟二十秒。

离心后，将血小板悬液通过 Luca 还原滤器转移至血小板保存容器中。所得为双剂量血小板浓缩物，其中含有约 7 × 10¹¹ 个血小板，体积为 420 mL，可采用 intercept 病原体灭活系统进行病原体灭活处理。该双剂量血小板浓缩物使用 intercept 处理套装进行处理，该套装包括抗凝容器、光照容器和两个保存容器。

将血小板悬液容器连接到拦截处理装置上的 Amin 容器，然后悬挂血小板。折断 Amin 容器底部的插管，使溶液流入光照容器中。

然后折断Amin容器顶部的套管，使血小板流入Amin容器，再进入透照容器中。轻轻混匀血小板与amotosin的混合物。轻压透照容器，排出其中的空气。

将照明容器与 amato 容器之间的管路进行密封，确保从照明容器延伸出的管路不超过四厘米。移除并丢弃空容器。将处理套装放入照明仪中，照明容器置于左侧的大隔间内，整理器置于右侧的小隔间内。

扫描捐赠编号、产品代码并进行处理。将批号输入照明仪中。

关闭金属盖和抽屉。按下启动按钮以开始照射。照射仪可向照明容器中的血小板氨基混合物提供可控剂量的UVA光。

氨基化合物插入病原体的核酸碱基对之间，这些病原体可能存在于血小板制剂中。光照后，会形成永久性交联，使DNA或RNA紧密结合，从而阻止病原体复制，避免受血者因血液制品而感染疾病。光照完成后，移除处理装置。

接下来，从整理架上取下容器，悬挂血小板及处理装置。折断照射容器出口处的导管，使血小板流入 CAD 容器中。CAD 容器内含有一片载有固定化大孔聚苯乙烯微珠的晶片，可降低血液制品中残留的 amin 水平。

注意不要弯曲 CAD 晶圆。将 CAD 容器中的空气排入照明容器中。在靠近 CAD 容器入口端口处封闭管路。

移除并丢弃空的照明容器。将带有已连接储存容器的 CAD 容器置于血小板振荡仪上，振荡 6 至 16 小时。此过程可使残留的 amlin 降低至浓度小于或等于 2 µM。

经过 CAD 处理后，将血小板单元从振荡器上取下，悬挂血小板袋，折断 CAD 容器出口处的导管，使血小板流入两个储存容器中。接着，排出储存容器中的空气。在 Y 型接头上方密封管路，并移除 CAD 容器。

结果是获得两份经过病原体灭活处理的血小板浓缩物，用于体外评估血小板功能。通过截距测定血小板剂量、pH、PO₂、乳酸生成量和葡萄糖消耗量。血小板浓缩物在储存期间持续检测至第7天。

该图显示了在拦截处理前双剂量血小板浓缩液的平均起始血小板剂量，以及储存第7天内各处理后分装制品的平均血小板剂量。由此可见，储存期间血小板损失约为9%。这一减少程度与常规血小板储存期间预期的血小板损失无差异。根据欧洲要求，血小板的pH值在保质期结束前必须保持在6.4以上。

在处理过程中，血小板浓缩物的pH值会因血小板浓度体积以及血小板储存容器的气体通透性而略有下降。该图显示了分装后的血小板制品在七天储存期间的pH值变化，pH值保持稳定，并始终维持在处理要求范围内。储存期间血小板应持续进行有氧代谢，这是血小板在输注给患者后体内功能活性的重要指标。

血小板的 O₂ 消耗和 CO₂ 产生表明，在储存期间，PL 24 10 容器中的血小板在七天内持续进行呼吸作用。同样，储存的血小板中无氧代谢也应持续进行。因此，葡萄糖消耗和乳酸产生也是血小板输注后功能状态的指标。

这两个图显示了储存七天期间乳酸和葡萄糖的水平。血小板的葡萄糖消耗与乳酸生成彼此一致。在七天的储存期间，有五个单位的葡萄糖水平低于1.11毫摩尔/升，此值为葡萄糖检测的下限。

Buffy层制备与汇集验证所获得的血小板浓缩物符合病原体灭活处理的输入标准，具体包括体积、血小板计数、血浆比例以及红细胞污染程度。最终制品在7天储存期内均满足验证标准，包括血小板剂量和pH值。与传统的Buffy层制备方法（仅产生单剂量血小板浓缩物）相比，该技术的主要优势在于：通过双剂量技术最大化血液采集成分的产出率，降低运营成本，并通过灭活经输血传播的病原体提高患者安全性。